168434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a módosított szerkezetű emberi adrenokortikotróp hormon és fragmensei előállítására

17 168434 18 69,0 g (37,2 mmól) védett Z-28-39-OtBu-t 1800 ml száraz DMF-ben oldunk és 6,3 g 10%-os csont­szenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reak­ció végén a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet 300 ml-re pároljuk. Keverés közben 20,2 g (42,85 mmól) Z-Ala-OPCP-t adunk hozzá, majd részletekben 4,76 ml (42,85 mmól) N-metilmorfolint. Másnap a sűrű mézgaszerű elegyet 4 liter 5%-os nátrium-hidrogén­karbonát-oldatba öntjük keverés és hűtés közben. A kivált anyagot szűrjük, vízzel semlegesre mossuk. A nyersterméket 1900 ml metanolban forrón oldjuk és 1100 ml vízzel kicsapjuk. Másnap szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 59,2 g (82,6%) védett Z-27-39-OtBu. Op.: 210 °C. R1/: 0,7. 9. lépés H-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)­Phe-OtBu (védett H-27-39-OtBu) 8,5 g (4,41 mmól) védett Z-27-39-OtBu-t 850 ml száraz DMF-ben oldunk és 0,9 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. Kitermelés: 7,65 g (96,9%) védett H-27-39-OtBu. Op.: 197 °C (bomlik); Rf: 0,3. 10. lépés Z-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu) Glu(OtBu) -Ser- Ala - Glu(OtBu) - Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (védett Z-25-39-ÖtBu) 3,58 g (2,0 mmól) védett H-27-39-OtBu-t és 0,65 g (2,0 mmól) Z-Asn-Gly-OH-t (1. példa) 30 ml száraz DMF-ben oldunk. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és hozzáadunk 1,8 g (2,4 mmól) DCC-PFPOH komp­lexet. 4 órai keverés után a reakcióelegyet 300 ml éterbe szűrjük és a kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 3,7 g (88%) védett Z-25-39-OtBu. Op.: 194 °C (bomlik) .R1/ : 0,3. 11. lépés H-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu­(OtBu)- Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu • HCl (védett H-25-39-OtBu • HCl) 3,92 g (1,87 mmól) Z-25-39-OtBu-t 400 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 0,6 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk: A maradékot száraz DMF-ben oldjuk és 6—8 mól ekvivalens sósavat tartalmazó piridint adunk hozzá. Az oldószer ledesztillálása után nyert olajat vízzel szűrőre visszük, vízzel majd etil-acetáttal mos­suk. Kitermelés: 3,22 g (86,1%) védett H-25-39-OtBu • HCl. Op.: 187 °C (bomlik); R1, 8 : 0,3. 12. lépés Z-lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )­Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(tBu)-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)­Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe- Pro-Leu-Glu(Ot-Bu)-Phe-OtBu (védett Z-15-39-OtBu) . 3,0 g (1,5 mmól) védett H-25-39-OtBu-HCl-t és 3,1 g (1,65 mmól) Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N02) -Arg(N02)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(tBu)-Pro-OH-t (155 254 és 155 880 számú magyar szabadalmi leírá­sok) 20 ml száraz DMF-ben oldunk, az. oldatot 0 C°-ra hűtjük és hozzáadunk 0,166 ml (1,5 mmól) i N-metilmorfolint, majd 1,4 g DCC-PFPOH komp­lexet. A reakcióelegyet 24 órán át szobahőmérsékle­ten keverjük, majd 400 ml éterbe szűrjük. A kivált csapadékot szűrjük, acetonba szuszpendálva összeke-5 verjük, szűrjük, szárítjuk. Kitermelés: 5,15 g (90%) védett Z-15-39-OtBu. Op.: 220 °C (bomlik). R1 * : 0,2; R«: 0,65. 13. lépés H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-10 Lys(BOC)-Val-Tyr(tBu)-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala- Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu-3HCl (védett H-15-39-OtBu) 5,0 g (1,31 mmól) védett Z-15-39-OtBu-t 100 ml 15 80%-os ecetsavban oldunk és hozzáadunk 3 g aktivált cinkport (készül 5 g cinkporból 30 ml 5 n sósavval), majd a szuszpenziót szobahőmérsékleten keverjük. A redukciót vékonyréteg kromatográfiás vizsgálatokkal ellenőrizzük. A redukció végén a szuszpenziót 20 szűrjük, majd a szűrletet bepárolva a maradékot vízzel eldolgozva szűrjük. A terméket feloldjuk 300 ml 80%-os ecetsavban, és 1,5 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot szárazra 25 pároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük. A terméket feloldjuk 40 ml piridinben, és hűtés mellett hozzáadunk 1,5 ml tömény sósavat tartal­mazó 10 ml piridint. Az oldat bepárlásával nyert maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük és vízzel mos-30 suk. Kitermelés: 4,0 g (85%) védett H-15-39-OÍ-­Bu-3HC1 (op.: 208 °C bomlik); R^: 0,35. 14. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-35 Lys - Val - Tyr- Pro - Asn -Gly -Ala-Glu-Asp-Glu-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OH (H-1-39-OH) 3,6 g (1,0 mmól) védett H-15-39-OtBu-3HCl-t és 2,0 g (1 mmól) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu> His-40 Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OH-HCl-t (155 254 és 155 880 számú magyar szabadalmi leírá­sok) 20 ml DMF-ben feloldunk, az oldatot 0 C°-ra lehűtjük, és hozzáadunk 0,11 ml (1 mmól) N-metil­morfolint és 0,95 g DCC-PFPOH komplexet. A 45 reakcióelegyet 24 órán át szobahőmérsékleten kever­jük, majd 200 ml éterbe szűrjük. A kivált terméket (5,6 g; Rí: 0,55) kiszűrjük, éterrel és vízzel mossuk. A fenti anyagból 1 g-ot feloldunk 20 ml trifluor­ecetsav és 1 ml merkaptoetanol elegyében. Az oldatot 50 1 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml vízben feloldjuk és ismét bepároljuk vákuumban. A bepárlási maradékot ezután 10 ml vízben oldjuk és trifluoracetát-ionokat acetát ciklusú Amberlite IRA 55 410 ioncserélő gyanta segítségével acetát-ionokra cse­réljük. Az oldatot liofilizáljuk és a nyersterméket 1 liter karboximetilcellulóz (CM-32) ioncserélőből készített oszlopon tisztítjuk 2—2 liter 0,13 mólos (pH 6,6), illetve 0,25 mólos (pH 7) ammónium-acetát 60 eluensek segítségével. Az átáramlási sebességet 100 ml/órára állítjuk be, és 120 25—25 ml-es frakciót gyűjtünk össze. A kívánt terméket a 98—106. frakciók tartalmazzák. Ezeket egyesítjük és liofilizáljuk. így 0,6 g (60%) H-l-65 39-OH-t kapunk. R^: 0,25. 9

Next

/
Thumbnails
Contents