168434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a módosított szerkezetű emberi adrenokortikotróp hormon és fragmensei előállítására

15 168434 16 kromatográfiás tisztítást gradiens elúcióval végezzük, az 1. példa 16. lépésében leírt módon. A főterméket tartalmazó frakciókat (65—71) összegyűjtjük és liofi­lizáljuk. így l,7g (70%) kromatográfiásan egységes H-l-32-OH-t nyerünk. Biológiai aktivitása: 162 NE/mg (Sayers-féle vizsgálat, USP XVIII. szerint) (Amerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyve). Aminosavanalízis: Lys 3,94(4); His 1,0(1); Arg 2,81(3); Asp 2,07(2); Met 0,72(1); Ser 2,72(3); Glu 2,94(3); Pro 2,96(3); Gly 2,89(3); Ala 2,2(2); Val 2,97(3);Tyr l,98(2);Phe 0,99(1). Tirozin-triptofán arány: számított 2,0; talált 1,92. Peptidtartalom: 87,5% (UV-alapon). R1/ : 0,21. 4. példa Az emberi ACTH szintézise (1-39) 1. lépés Z-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-(OtBu)-Phe-OtBu (védett Z-31-39-OtBu) 31,6 g (48,3 mmól) Z-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu-t [S. Bajusz, T. Lázár: Acta Chim. Hung. 48, 111 (1966)] 310 ml DMF-ben oldva 3 g 10%-os csontsze­nes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk 100 ml-re, és lehűtjük -20 C°-ra. 38,35 g (47,4 mmól) Z-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-OH-t (155 254 számú magyar szabadalmi leírás) 100 ml száraz DMF-ben oldunk és 5,27 ml (47,4 mmól) N-metilmorfolin hozzáadása után —10 C°-on keverés közben hozzáadunk 6,26 ml (47,4 mmól) klórszén­sav-izobutilésztert. A reakcióelegyet 8 percig--10 C°-on keverjük, majd lehűtjük -20 C°-ra és hozzá­öntjük a fenti aminokomponens előhűtött oldatát. A reakcióelegyet —10 C°-on 15 percig, 0 C°-on 1 óráig és végül szobahőmérsékleten 1 óráig keverjük. A reakcióelegyet ezután 45 ml N-metil-morfolint tartal­mazó 2 liter jeges vízbe öntjük. A csapadékot szűrjük, mossuk 700 ml citromsavoldattal, vízzel, végül éter­rel. Termelés: 55,85 g (89,9%) Z-31-39-OtBu. Op.: 180 °C (bomlik); R*: 0,7. 2. lépés H-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-(OtBu)- Phe-OtBu (védett H-31-39-OtBu) 78,95 g (60,15 mmól) védett Z-31-39-OtBu-t 1500 ml 80%-os ecetsavban feloldunk és 6,5 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot éterrel eldör­zsöljük, szűrjük, szárítjuk. Termelés: 74,33 g (99%) védett H-31-30-OtBu. Op.: 105 °C (bomlik). R7 { : 0,5. 3. lépés Z-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (védett Z-30-39-OtBu) 44,5 g (85,8 mmól) Z-Glu(OtBu)-OH-DCHA sót 450 ml száraz DMF-ben szuszpendálunk. 9,6 ml (85,8 mmól) N-metilmorfolin hozzáadása után keverés közben —10 C°-on 11,3 ml (85,8 mmól) klórszénsav­izobutilésztert csepegtetünk az oldathoz, majd lehűt­jük —20 C°-ra. Ezen a hőmérsékleten hozzáöntjük 88,5 g (71,5 mmól) védett H-31-39-OtBu 300 ml száraz,DMF-fel készített -20 C°-ra hűtött oldatát. A keverést 15 percig —10 C°-on, 1 órát 0 C°-on és 1 órát szobahőmérsékleten folytatjuk, majd a reakció­elegyet 8 liter n citromsavoldatba öntjük. A kivált csapadékot szűrve, mosva vízzel, éterrel 104,1 g (97,2%) védett Z-30-39-OtBu-t nyerünk. Op.: 136-138 °C (bomlik). R*: 0,8. 4. lépés H-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-5 Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (védett H-30-39 -OtBu) 103,1 g (68,8 mmól) Z-30-39-OtBu-t 1500 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 8,2 g 10%os csontsze­nes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció 10 végén a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot éterrel, eldörzsöljük, szűrjük, mossuk, éterrel, szárítjuk. így 90,75 g (92,7%) védett H-30-39-OtBu-t nyerünk. Op.: 118 °C (bomlik); RS : 0,5. 15 5. lépés Z-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (védett Z-29-39-OtBu) 38,3 g (75,9 mmól) Z-Asp(OtBu)~OH-DCHA sót 20 400 ml száraz DMF-ben szuszpendálunk, majd 8,5 ml (76,6 mmól) N-metilmorfolin hozzáadása után -10 C°-ra hűtjük és keverés közben hozzácsepegtetünk 10 ml (75,9 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. A reak­cióelegyet -20 C°-ra hűtjük és hozzáöntjük 90 g 25 (63,25 mmól) védett H-30-39-OtBu 250 ml dimetil­formamidos, -20 C°-ra hűtött oldatát. A keverést tovább folytatjuk -10 C°-on 15 percig, 0 C°-on 1 óráig és szobahőmérsékleten 1 óráig. Ezután a kivált sót szűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradé-30 kot n citromsavoldattal eldolgozva szűrjük, semle­gesre mossuk. Termelés: 98,5 g (93%) védett Z-29-39-OtBu. Op.: 185 °C (bomlik); R*: 0,8. 6. lépés H-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-35 Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (vé­dett H-29-39-OtBu) 67,25 g (42,15 mmól) védett Z-29-39-OtBu-t 1300 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 6,2 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A 40 reakció végén a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. Termelés: 63,8 g (95%) védett H-29-39-OtBu. Op.: 128-132 °C (bomlik); Rf : 0,3. 45 7. lépés Z-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-Phe-OtBu (védett Z-28-39-OtBu) 27,3 g (52,55 mmól) Z-Glu(OtBu)-OH-DCHA sót 270 ml száraz DMF-ben szuszpendálunk, 5,9 ml (53,2 50 mmól) N-metilmorfolint adunk hozzá, lehűtjük —10 C°-ra és keverés közben ezen a hőmérsékleten hozzá­csepegtetünk 6,95 ml (52,55 mmól) klórszénsav-izo­butilésztert, majd 8 perc után lehűtjük —20 C°-ra. Ezen a hőmérsékleten hozzáöntjük 69,9 g (43,8 55 mmól) védett H-29-39-OtBu 270 mldimetil-formami­dos, —20 C°-ra előhűtött oldatát. A hőmérsékletet —10 C°-on 15 percig, 0 C°-on 1 óráig és szobahőmér­sékleten 1 óráig tartjuk. Ezután a kivált sót szűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot n citrom-60 savoldattal szűrőre visszük, vízzel semlegesre mossuk. Kitermelés: 70,15 g (86,2%) védett Z-28-39-OtBu. Op.: 205 °C (bomlik); R»f 3 : 0,9. 8. lépés Z-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-Glu(OtBu)-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu(OtBu)-65 Phe-OtBü(Z-27-39-OtBu) 8

Next

/
  • Layout
  • Zoom
  • Rotation
Thumbnails
Contents