168434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a módosított szerkezetű emberi adrenokortikotróp hormon és fragmensei előállítására
11 168434 12 0,65 g (0,49 mmól) védett H-17-24-OH-3HCl-t 7 ml DMF-ben szuszpendálunk, majd hozzáadunk 0,07 ml trietil-amint és 0,3 g (0,6 mmól) Z-Lys(BOC)ONP-t. A reakcióelegyet 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd szárazra pároljuk és a maradékot etil-acetáttal szűrőre visszük, és kevés vízzel mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 0,6 g (76,3%) védett Z-16-24-OH-2HC1. R£:0,45. 6. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(tBu)-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)OtBu-2HCl (védett Z-15-31-OtBu-2HCl) 0,18 g (0,1 mmól) védett Z-15-24-OH-2HCl-t és 0,10 g (0,1 mmól) védett H-25-31-'OtBu-t oldunk 1 ml DMF-ben és az oldathoz 0,091 g (0,12 mmól) DCC-PFPOH komplexet adunk. 5 órai keverés után a reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradék éterrel történő eldörzsölésével, szűréssel, szárítással 0,25 g (88,8%) védett Z-15-31-OtBu-2HCl-t nyerünk (Rj: 0,5), melyet az 1. példában leírt módon dolgozhatunk tovább. 3. példa Az emberi ACTH! _32 szintézise 1. lépés Z-Glu(OtBu)-Ser-Ala-OtBu (védett Z-30-32-OtBu) 23,9 g (100 mmól) Z-Ser-OH-t és 14,5 g (100 mmól) H-Ala-OtBu-t oldunk 150 ml metilén-kloridban. Az oldatot -10 C°-ra hűtjük, és hozzácsepegtetünk 20,6 g (100 mmól) DCC 100 ml metilén-kloridos oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül 0 Cu -on keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a kivált DCU-t szűrjük és a szűrletet 3X70 ml n sósavoldattal, 3X70 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, és végül vízzel mossuk. Szárítás után a metilén-kloridot ledesztilláljuk és az olajos maradékot n-hexánnal eldörzsölve megszilárdítjuk. így 30,0 g (82%) nyers védett Z-Ser-Ala-OtBu-t nyerünk, melyet 600 ml metanolban oldunk, és 2 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakciót vékonyréteg kromatográfiásan ellenőrizzük. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk és az olajos maradékot 220 ml etil-acetátban oldjuk. Ehhez az oldathoz 33,0 g (76 mmól) Z-Glu(OtBu)-ONSu-t adunk, és másnap az oldatot kirázzuk 3X50 ml sósavoldattal, 3X50 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és végül vízzel. Szárítás után az etil-acetátot ledesztilláljuk és a maradék olajat etil-acetát és petroléter elegyéből kristályosítjuk. így 31,5 g (75%) védett Z-30-32-OtBu-t nyerünk. Op.: 72-74 °C; R1 / : (0,6; [a] D . = = -28,9° (c=l; etanolban). Elemzés a C27 H4iN 3 0 9 (M: 551,84) összegképlet alapján: számított: C 58,8%; H 7,5%; N 7,7%; talált: C58,8%; H 7,7%; N 7,8%. 2. lépés H-Glu(OtBu)-Ser-Ala-OtBu (H-30-32-OtBu) 16,0 g (29 mmól) védett Z-30-32-OtBu-t 350 ml metanolban oldunk és 1,6 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot metanol-éter elegyéból kristályosítjuk. így 9,06 g (75%) védett H-30-32-OtBu-t nyerünk. Op.: 135-136 °C; R1 / : 0,15;[a]D = -25,9° (c=l;etanol). Elemzés a Ci9 H3 S N 3 0 7 (M: 417,80) összegképlet 5 alapján: számított: C 54,6%; H 8,5%; N 10,1%; talált: C54,5%; H8,4%; N 9,8%. 3. lépés Z-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-OtBu 10 (Z-29-32-OtBu) 8,2 g (19,6 mmól) védett H-30-32-OtBu-t és 8,0 g (19,0 mmól) Z-Asp(OtBu)-ONSu-t 80 ml etil-acetátban oldva reagáltatunk. Másnap az oldatot kirázzuk 3X20 ml sósavoldattal, 3X20 ml 5%-os nátrium-hidro-15 gén-karbonát-oldattal /és végül vízzel. Szárítás után az etil-acetátot ledesztilláljuk és a maradékot petroléterrel szűrőre visszük, majd szárítjuk. így 12,08 g (85,5%) védett Z-29-32-OtBu-t nyerünk. Op.: 85-87 °C; R1 /: 0,55; [a]D = -32,8° (c=l; 20 etanol). Elemzés a C3S H54 Oi 2 N 4 (M: 722,81) összegképlet alapján: számított: C 58,2%; H 7,5%; N 7,8%; talált: C58,3%; H 7,6%; N 7,3%. 25 4. lépés H-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-OtBu (védett H-29-32-OtBu) 10,5 g (14,5 mmól) védett Z-29-32-OtBu-t 130 ml metanolban oldunk és 1 g 10%-os csontszenes pallá-30 dium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradék petroléteres eldörzsölésével, szűrésével, majd szárításával 8,35 g (97,5%) védett H-29-32-OtBu-t nyerünk. Op.: 81-82 °C. R1 / : 0,1; 35 [aJD = -24,3° (c=l; etanol). 5. lépés Z-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Alá-OtBu (védett Z-28-32-OtBu) 5,0 g (11,5 mmól) Z-Glu(OtBu)-ONSu-t és 6,6 g 40 (11,2 mmól) védett H-29-32-OtBu-t 100 ml kloroformban oldva reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet 3X30 ml nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, és végül vízzel kirázzuk. Szárítás után a kloroformot ledesztilláljuk és a maradékot kloroformból petroléterrel 45 leválasztva tisztítjuk. Kitermelés: 8,45 g (83%) védett Z-28-32-OtBu. Op.: 168-169 "C-R1 / : 0,5; [<x] D =. -29° (c=l; etanol). Elemzés a C44 H«, Ns0 15 (M: 908,07) összegképlet alapján: 50 számított: C 58,2%; H 7,7%; N 7,7%; talált: C58,4%; H 7,7%; N 7,5%. 6. lépés H-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-Ala-OtBu (védett H-28-32-OtBu) 55 8,0 g (8,8 mmól) védett Z-28-32-OtBu-t 160 ml metanolban oldva 1 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezünk. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot éter és petroléter elegyével eldörzsöljük, 60 szűrjük, szárítjuk. 6,4 g (94%) védett H-28-32-OtBu-t nyerünk. Op.: 138-139 °C; R1 / : 0,1; [a]D = -29,7° (c=l; etanol). 7. lépés Z-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-65 Ala- OtBu (védett Z-27-32-OtBu) 6
