168434. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a módosított szerkezetű emberi adrenokortikotróp hormon és fragmensei előállítására
7 168434 8 eldörzsölve szűrjük. A nyersterméket 43 ml forró etil-acetátban oldjuk és 7 ml n-hexánt adunk hozzá. Másnap a kivált kristályokat szűrjük, szárítjuk. Kitermelés: 13,0 g (76,5%) védett Z-28-31-OtBu. Op.: 184-185 °C;Rj: 0,80. 5 Elemzés a C4S E n 0 M N 4 (M: 893,1) összegképlet alapján: számított: C 60,5%, H8,l%; talált: C 60,8%, H 8,0%. 10 5. lépés H-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)OtBu (védett H-28-31-OtBu) 12,5 g (14 mmól) védett Z-28-31-OtBu-t 250 ml metanolban oldva hidrogénezzük,, majd a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A 15 szilárd maradékot n-hexánnal eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Kitermelés 10,09 g (95%) védett H-28-31-OtBu. Op.: 139-140°C;RV :0,3;Rj:0,25. Elemzés a C37H66 0 12 N 4 (M: 258,97) összegképlet 20 alapján: számított: N 7,4%; talált: N 7,6%. 6. lépés Z-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser- 25 (tBu)-OtBu (védett Z-27-31 -OtBu) 6,62 g (8,7 mmól) védett H-28-31-OtBu-t 65 ml etil-acetátban oldunk és hozzáadunk 2,72 g (8,5 mmól) Z-Ala-ONSu-t, mely 5 perces keverés után szintén feloldódik. Egy órai keverés után a termék 30 azoldátbólkiválik, melyet éjszakai állás után szűrünk és etil-acetáttal mosunk. A nyersterméket 65 ml etil-acetátból kristályosítjuk át. Kitermelés: 6,61 g (80,7%) védett Z-27-31-OtBu. Op.: 193-195 "CjR1 /: 0,35;R£: 0,75. 35 Elemzés a C48 H,, 015 N s (M: 964,18) összegképlet alapján: számított: C 59,8%, H8,l%; talált: C59,6%, H 8,1%. 40 7. lépés H-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu (védett H-27-31-OtBu) 6,61 g (6,85 mmól) védett Z-27-31-OtBu-t 150 ml metanolban oldunk enyhe melegítéssel, majd az oldatot szobahőmérsékletre hűtve 1 g csontszenes pallá- 45 dium jelenlétében fél óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után nyert oldatot szárazra pároljuk és a szilárd maradékot n-hexánnal eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. Kitermelés: 5,55 g (97,6%) védett H-27-31-OtBu. Op.: 50 138-142 °C;R?: 0,15. , Elemzés a C4oH7i013 N s (M : 830,05) összegképlet alapján: számított: C57,9%, H8,6% N8,4%; talált: C57,7%, H.8,3%, N8,l%. 55 8. lépés Z-Asn-OPFP 1,33 g (5 mmól) Z-Asn-OH-t és 3,04 g pentafluorfenol 3,5 ml DMF-ben oldunk és hozzáadunk 10,5 ml dioxánt. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és keverés közben 60 hozzáadunk 1,013 g (5,5 mmól) DCC-t. Ezután a reakcióelegyet két órán keresztül 0 C°-on keverjük, majd a DCU-t kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 8 ml éterrel eldörzsöljük és a kristályos fehér anyagot 65 szűrjük, majd kevés hideg éterrel mossuk. Kitermelés: 2,02 g (93,5%) Z-Asn-OPFP. Op.: 149-150 "CRf: 0,35. Elemzés a Ci8 H13 0 5 N 2 F s (M: 432,31) összegképlet alapján: számított: C 50,0%; H 3,0%; N 6,5%; talált: C50,2%; H 3,1%; N6,4%. 9. lépés Z-Asn-Gly-OtBu (Z-25-26-OtBu) 0,43 g (1 mmól) Z-Asn-OPFP-t enyhe melegítéssel 10 ml dioxánban oldunk, az oldatot 10 C°-ra hűtjük és 0,185 g (1,1 mmól) H-Gly-OtBu-HCl-t adunk hozzá. Ezután a kapott szuszpenzióhoz keverés közben 0,154 ml (1,1 mmól) trietil-amint adunk, és a reakcióelegyet fél órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrés után a kapott oldatot szárazra pároljuk. A géles maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. így 0,34 g (89,8%) Z-Asn-Gly-OtBu-t nyerünk. Op.: 150-151 C; R£: 0,6. Elemzés a Cl8 H 2S 0 6 N 3 (M: 379,42) összegképlet alapján: számított: Nll,l%; talált: Nll,2%. 10. lépés Z-Asn-Gly-OH (Z-25-26-OH) 9,13 g (26 mmól) Z-Asn-Gly-OtBu-t 90 ml trifluorecetsavban oldunk és fél órai állás után az oldathoz 450 ml száraz étert adunk. A kivált fehér csapadékot szűrjük, éterrel mossuk. A nyersterméket 35 ml vízből kristályosítva 6,56 g (78%) Z-Asn-Gly-OH-t nyerünk. Op.: 170-172 0 C;R?: 0,45. lí. lépés Z-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu. (védett Z-25-31 -OtBu) 2,59 g (8 mmól) Z-Asn-Gly-OH-t 6,65 g (8 mmól) H - Ala -Glu(01 Bu)-Asp(OtBu)-Glu(tBu)-Ser(tBu)-Ot-Bu-t és 4,86 g pentafluorfenolt 28 ml DMF-ben oldunk, az oldatot 0 C°-ra hűtjük és hozzáadunk 1,81 g (8,8 mmól) DCC-t. A reakcióelegyet fél órán át 0 C°-on, majd 2,5 órát szobahőmérsékleten keverjük. A DCU kiszűrése után nyert szűrletet szárazra pároljuk, és a maradékot etil-acetáttal eldörzsölve szűrjük. Kitermelés: 7,3 g (80,5%) védett Z-25-31-OtBu. Op.: 194 °C (bomlik); R? : 0,6. 12. lépés H-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)-Asp-(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu. (védett H-25-31 -OtBu) 6,47 g (5,7 mmól) védett Z-25-31-OtBu-t 220 ml etanol és 20 ml DMF elegyében oldunk és az oldaton keresztül, 1 g 10%-os csontszenes palládium jelenlétében, 1 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk. A katalizátor kiszűrése után nyert oldatot szárazra párolva a visszamaradó géles anyagot éterrel eldolgozva szűrjük és mossuk. Kitermelés: 4,9 g (86,2%) védett H-25-31-OtBu. Op.: 174-Í76 °C (bomlik); R? : 0,2. 13. lépés Z-Lys(BOC-Lys)BOC(-Arg(N02 )-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(tBu)-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu(OtBu)- Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Ser-ítBuV OtBu (védett Z-l 5-31-OtBu) 7,4 g (4 mmól) Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N02 )Arg(N02 )-Pro-Val-Lys(BOC>Vá-Tyr(tBu)-Pro-OH-t (155 254 számú magyar szabadalmi leírás) és 4,2 g (4,2 mmól) védett H-25-31-OtBu-t 25 ml DMF-ben 4
