168017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7béta-amino-3-cefem-3-ol- 4-karbonsavszármazékok előállítására
59 168017 60 jellemző sávok 3,00, 5,62, 5,82, 5,95, 6,70, 7,32 és 8,16 pí-nál. A fent használt jódozóreagenst a következőképpen állíthatjuk elő: Mágneses keverővel, visszacsepegő hűtővel és nitrogénpalackkal felszerelt 250 ml-es gömblombikban 42 g frissen desztillált N,N'-diciklohexil-karbodiimidet nitrogénatmoszférában szobahőmérsékleten feloldunk 90 ml metil-jodidban, és a színtelen reakcióelegyet 72 óráig 70°-os vízfürdőn keverjük. A reakcióidő letelte után a vörösbarna oldatból a feles metil-jodidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a nyúlós vörösbarna maradékot 40°-on feloldjuk 150 ml abszolút toluolban. A néhány óra alatt kiváló kristálytömeget nitrogénpalackkal összekötött üvegszűrőnuccs segítségével, levegő kizárása mellett az anyalúgból leválasztjuk, a szűrőnuccson 3 x 25 ml abszolút jéghideg toluollal mossuk az enyhén sárgás szennyezések eltávolítása céljából. Szobahőmérsékleten 0,1 Hgmm nyomás alatt 20 óráig szárítjuk; az N-metil-N,N'-diciklohexil-karbodiimidium-jodidot színtelen, 111—113°-on olvadó kristályok alakjában állíthatjuk elő. Infravörös abszorpciós spektrum (kloroformban): jellemző sávok 4,72 és 6,00 At-nál. 0,400 g 3-jód-metil-7-béta-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észter 15 ml 90%-os vizes ecetsavval készült oldatát jeges fürdőben 0°-ra lehűtjük és alapos keverés közben részletekben hozzáadunk 2,0 g cinkport. 30 percig 0°-on reagáltatjuk, majd a nem-reagált cinkport diát omaföld-betéttel ellátott szűrőnuccs segítségével leszűrjük; a szűrőn maradt anyagot többször szuszpendáljuk friss metilénkloridban és újra leszűrjük. Az egyesített szűrleteket csökkentett nyomás alatt bepároljuk, hozzáadunk abszolút toluolt és csökkentett nyomáson betöményítjük. A maradékot keverés közben felvesszük 50 ml metilénkloriddal és 30 ml 0,5 M vizes dikáliumhidrogén-foszfát-oldattal; a vizes fázist leválasztjuk, újra extraháljuk 2 x 30 ml metilénkloriddal és döntjük. A szerves kivonatokat többször mossuk telített vizes nátrium-klorid-oldattal, magnézium-szulfát felett megszárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 22 g szilikagélt tartalmazó oszlopon (10% vizet hozzáadva) kromatografáljuk. A 3-metilén-7 -b é t a-fenil-acetil-amino-cefam-4-alfa-karbonsav-difenil-metil-észtert 2% ecetsav-etil-észtert tartalmazó metilénkloriddal eluáljuk és metilénklorid/hexán elegyből kikristályosítjuk. Olvadáspont 144-147°; [tt]J?= -18° ± 1 (c = 0,715 kloroformban); ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes etanolban): X mx = 254 mfi (£ = 1540) és 260 rrui (£ = 1550); infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 2,94, 5,65, 5,74, 5,94, 6,26 és 6,67 ju-nál. 2,0 g 3-metilén-7-béta-fenil-acetil-amino-cefam-4-alfa-karbonsav-difenil-metil-észter 80 ml abszolút metilén-kloriddal készült, 0°-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 3,2 ml abszolút piridint és 32 ml 8%-os metilénkloridos foszfor-pentaklorid-oldatot; 1 óráig nitrogénatmoszférában —10 és —5° között keverjük. Ezután a reakcióelegyet lehűtjük -25°-ra, hozzáadunk 25 ml abszolút metanolt és 1 óráig —10°-on, 1,5 óráig szobahőmérsékleten keverjük. Ekkor hozzáadunk 80 ml 0,5 M-os vizes kálium-dihidrogénfoszfát-oldatot, a pH-t 20%-os vizes foszforsawal 2-re állítjuk be és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük. Ezután a szerves fázist leválasztjuk; a vizes fázist 2 x 150 ml metilénkloriddal extraháljuk, a szerves oldatokat egyesítjük, nátrium-szulfát felett 5 szárítjuk és bepároljuk. Az olajos maradékot felvesszük 25 ml ecetsav-etil-észterrel és 0°-on hozzáadjuk 1,14 g 4-metil-fenil-szulfonsav-monohidrát 25 ml ecetsavval készített oldatát. A kivált nagytérfogatú csapadékot leszűrjük, hideg ecetsav-etil-észterrel és 10 dietil-éterrel mossuk, szárítjuk és metilénklorid/dietiléter elegyből átkristályosítjuk. Színtelen tűkristályok alakjában 7-béta-amino-3-metüén-cefam-4-alfa-karbonsav-difenil-metil-észter 4-metil-szulfonátját kapjuk. Olvadáspont 153-155°; [a]D = -14° ± 10° (c = 15 0,97 metanolban); ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 257 mju (£ = 1500); infravörös abszorpciós spektrum (metüénkloridban): jellemző sávok 3,5, 5,60, 5,73, 8,50, 9,68 és 9,92 /u-nál. 50 ml metanollal készített 0,553 g 7-béta-amino-3-20 metilén-cefam-4-alfa-karbonsav-difenil-metil-észter 4-metil-fenil-szulfonát -60°-ra lehűtött oldatán 4 percig oxigén- és ózonáramot bocsátunk át (0,35 mM ózon per perc). További 5 perc múlva a halványkék oldathoz 0,3 ml dimetil-szulfidot adunk. Az elegyet 25 15 percig -70°-on, 1 óráig -12°on és 1 óráig jégfürdőn keverjük, majd bepároljuk. A maradékot felvesszük kevés metilénkloriddal, majd zavarosság fellépéséig dietil-étert adunk hozzá és állni hagyjuk. A mikrokristályos, vöröses por alakú csapadékot leszűr-30 jük. 7-béta-amino-cefarn-3-on-4|-karbonsav-difenilmetil-észter 4-metil-szulfonátját kapjuk, mely főleg enolalakban mint 7-béta-amino-3-cefem-3-ol-4-karbonsav-difenil-metil-észter 4-metil-fenil-szulfonát van jelen. Olvadáspont 143-145° (bomlással); rétegkro-35 matogram (szilikagél) Rf~0,28 (rendszer: ecetsav-etilészter(piridin)víz 85:10:5); ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 262 mp (£ = 3050) és 282 m/u (£ = 3020); infravörös abszorpciós spektrum (metüénkloridban): jellemző sávok 5,58, 40 5,77 (váll), 6,02 és 6,22 ju-nál. 25 metanolban oldott, 0,50 g 7-béta-amino-cefam-3 -on-4ij-karbonsav-difenil-metil-észter 4-metil-fenilszulfonáthoz — amely többségében enol alakban, azaz mint 7-béta-aminc-3-cefem-3-ol-4-karbonsav-difenil-45 metil-észter 4-metil-fenil-szulfonát van jelen — 0°-on maradandó sárga festődésig dietil-éterben oldott diazo-metánt adunk. 10 percig jeges fürdőben keverjük, majd bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Toluol/ecetsav 2:1 keverékkel eluáljuk az 50 olajos 7-béta-dimetil-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert. Rétegkromatogram (szilikagél; előhívás jódgőzzel): Rf~0,39 (rendszer: ecetsav-etil-észter); ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 265 m/x (£ = 6100); infravörös 55 abszorpciós spektrum (metüénkloridban): jellemző sávok 3,33, 5,63, 5,81 és 6,23 ju-nál. Ecetsav-etü-észterrel történő további elúcióval olajos 7-béta-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav-difenilmetil-észtert kapunk. Rétegkromatogram (szilikagél; 60 előhívás jódgőzzel): Rf~0,20 (rendszer: ecetsav-etilészter); ultraibolya abszorpciós spektrum (etanolban): Xmax = 265 m/i ( £ = 5900); infravörös abszorpciós spektrum (metüénkloridban): jellemző sávok 2,98, 3,33,5,62,5,81 és 6,24/u-nál. 65 Diazo-metán helyett dimetü-szulfátot is használ-30
