168017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7béta-amino-3-cefem-3-ol- 4-karbonsavszármazékok előállítására
43 168017 44 punk belső só formájában. Olvadáspont 180° (bomlással): rétegkromatogram (szilikagél; azonosítás jódgőzzel): Rf~0,24 (rendszer: n-butanol) ecetsav (víz 67:10:23) és Rf~0,57 (rendszer: izopropanol(hangyasav)víz 77:4:19); ultraibolya abszorpciós spektrum: 5 Xmax = 228 mju (£ = 12000) és 271 nyt (£ = 6800, 0.1 N sósavban, és Xmax = 227 mu (£ = 10500) és Xván = 262 mu (£ = 8Ó00) 0,1 N vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban. 10 9. példa 0,336 g D-alfa-terc-butil-karbonil-amino-alfa-(4-izotiazolil)-ecetsav 100 ml metilénkloriddal készített, 0°-ra lehűtött oldatát 30 percig keverjük 0,132 g N-metil-morfolinnal és 0.180 ml klór-hangyasav-izo- 15 butil-észterrel nitrogénatmoszférában, majd -10°-ra lehűtjük és egymás után hozzáadunk 0,400 g 7-béta-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav-difenil-metil -észtert és 0,110 ml N-metil-morfolint. A reakcióelegyet 30 percig —10°-on és 60 percig 0°-on keverjük, 20 felhígítjuk 30 ml vízzel és pH-ját 40%-os vizes dikálium-hidrogén-foszfáttal 7,9-re állítjuk be. A fázisokat szétválasztjuk, a vizes oldatot metilénkloriddal extraháljuk, az egyesített szerves oldatokat telitett vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium-szulfát 25 felett szárítjuk és csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A maradékot preparatív rétegkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél; rendszer: toluol/ecetsav-etil-észter 1:1, azonosítás X = 254 m/u-os ultraibolyafénnyel), így 0,68 Rf-értékű 7-béta-[D-alfa-terc-butil- 30 o xi-karbonil-amino-alfa-(4-izotiazoül)-acetil-amino] -3-metoxi-2- cefem-4-alfa-karbonsav-difenil-metil-észtert állítunk elő. Metilénklorid/pentán elegyből átkristályosítva olvadáspontja 170°; [a] p = +147° ± 1° (c = 0,79 kloroformban); rétegkromatogram (szilikagél; 35 azonosítás jódgőzzel): Rf~0,68 (rendszer: toluol/ecetsav-etil-észter 1:1); ultraibolya abszorpciós spektrum (957c-os vizes etanolban): Xmax = 248 m/n (£ = 10700); infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 2,96, 5,63, 5,75, 5,87, 6,18 és 40 6,72 mikronnál; az amorf 7-béta-[D-alfa-terc-butiloxi - karbonil - amino - alfa - (4 - izotiazolil)-acetil-amino] -3-metoxi-3- cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észterre vonatkozó Rf~0,43, [a] *° = +26° ± 1° (c = 0,65 kloroformban); rétegkromatogram (szilikagél; azono- 45 sítás jódgőzzel): Rf~0,43 (rendszer: toluol/ecetsavetil-észter 1:1); ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes etanolban): Xmax = 250 m/Lt (£ = 12200) és 280 mju (£ = 5900); infravörös abszorpciós spektrum (metilénkloridban): jellemző sávok 2,94, 50 5,65, 5,71 (váll), 5,88, 6,28 és 6,73 /Lt-nál. 10. példa A 7-béta-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsavat a következő általános eljárás szerint N-acilezhetjük és a 55 m eg felelő 7-béta-Ac-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsavat — ahol Ac acilcsoportot jelent — állíthatjuk elő. A változat: 0,5 mM savat (AcOH) 10 ml abszolút metilénkloridban 0,070 ml (0,5 mM) trietil-amin go (törzsoldat: 28,0 ml = 200 mM trietil-amin, metilénkloriddal 100 ml-re hígítva) hozzáadás közben feloldunk. A -15°-ra lehűtött oldathoz hozzáadunk 0,2 ml metilénkloridban oldott 0,0565 ml (0,5 mM) triklór-ecetsavkloridot (törzsoldat: 22,6 ml = 200 ^ mM triklór-ecetsavklorid, metilénkloriddal 100 ml-re hígítva) és 30 percig -15°-on keverjük. A vegyes anhidridet [Ac-0-C(=0)-CCl3 ] tartalmazó oldathoz hozzáadjuk 0,057 g (0,25 mM) 7 béta-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav és 0,070 ml (0,5 mM) trietil-amin 5 ml metilénkloriddal készült, -15°-ra lehűtött finom eloszlású iszapját és 30 percig -15°on, majd 30 percig 20°-on ultrahanggal kezeljük. A szokásosan barna reakcióoldatot csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A maradékhoz hozzáadunk 10 ml 10%-os vizes dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot (pH 8,9) és 5 ml ecetsav-etil-észtert; az anyag megoszlik a két oldószer között. A vizes fázist 20%-os vizes foszforsawal pH 2,6-ra állítjuk be, majd ecetsav-etilészterrel kimerítően extraháljuk. Az ecetsav-etil-észteres kivonatot 30-50 ml vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A maradékot alkalmas oldószerben szilikagél-rétegen 2-5 óráig kromatografáljuk. A lemezt nitrogénatmoszférában szobahőmérsékleten megszárítjuk, majd az ultraibolya-fényben (X = 254 mju) abszorbeáló szilikagél-zónát a lapról mechanikus úton eltávolítjuk és háromszor 10-20 ml etanollal vagy metanollal extraháljuk. A kivonatot csökkentett nyomáson bepárolva 7-béta-acil-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsavat kapunk homokszínű vagy csaknem színtelen maradék formájában. Ha a lemez egynél több ultraibolya-fényben abszorbeáló sávot mutat, az egyes zónákat az előbb leírtak szerint külön-külön feldolgozzuk. A különböző zónákból kapott anyagok egy próbájával lemez-diffúziós tesztet végzünk Staphylococcus aureussal szemben. A mikrobiológiailag legaktívabb zóna anyagán újból preparatív rétegkromatográfiás elválasztást végzünk és így izolálni tudjuk a kromatográfiásan egységes terméket. B változat: sav 0,2 mM nátriumsójához (AcONa) 5 ml dimetil-formamidban hozzáadunk 0,2 mM triklóracetilkloridot mint az A változatnál, továbbá 0,2 mM 7-béta-amino-3-metoxi-3-cefem4-karbonsavat és 0,2 mM trietil-amint 2 ml dimetil-formamidban, az A változathoz hasonlóan, és feldolgozzuk. C változat: 0,25 mM savklorid (AcCl) és 4 ml metilénklorid elegyét hozzáadjuk 0,058 g (0,25 mM) 7-béta-amino-3-metoxi-3-cefem-4-karbonsav és 0,070 ml (0,5 mM) trietil-amin és 5 ml metilénklorid -15°-ra lehűtött oldatához és az A változathoz hasonlóan átalakítjuk és feldolgozzuk. A fenti A, B és C változatnál trietil-amin helyett trimetil-klór-szilánt is használhatunk piridin jelenlétében. 11. példa Ha a 10. példa eljárásában, B változatot alkalmazva, acilező kiindulási anyagként malonsav-metilfélészter nátriumsót használunk, úgy 3-metoxi-7-béta-meto xi-karbonil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsavat kapunk, mely rétegkromatogramon (szilikagél; rendszer: ecetsav-etil-észter(ecetsav 9:1) 0,5-0,6 Rf-értéket mutat; ultraibolya abszorpciós spektrum (metanolban):Xmax 265 mju-nál; infravörös abszorpciós spektrum (ásványi olajban): jellemző sáv 5,66 /Lt-nál. 12. példa Ha a 10. példában leírt eljárásnál a C változatot 22
