167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására
17 167968 18 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy 8,5 mg/ml 7-(a-amino-1 '-ciklohexenil-acetamido)-cefalosporánsavat tartalmaz. A terméket vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel szüikagél adszorbensen vizsgálva 0,83 Rf -értéknél találunk foltot (futtatószer: 70%-os vizes etanol). 9. példa Xanthomonas citri IFO—3835 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 200 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on tenyésztjük. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 200 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 100 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpCnzióhoz 100 ml olyan vizes 0,1 N dikáliumhidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% 1-ciklohexenilglicin-tioglikolésztert és 2% 7-aminocefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy 6,6 mg/ml 7-(a-amino-r-ciklohexenilacetamido)-cefalosporánsavat tartalmaz. 10. példa Pseudomonas melanogenum IFO—12020 vagy Acetobacter turbidans IFO—3225 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% 7. táblázat szerinti 1-ciklohexilglicin-alkilésztert és 2% 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-(a-amino-r-ciklohexenil-acetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsavat („K" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 7. táblázatban adtuk meg. 7. táblázat 1-ciklohexe- képződött nil-glicin-al- „K"jelű Mikroorganizmus kilészter vegyület mennyisége mg/ml Pseudomonas melanogenum IFO-12 020 etilészter 3,5 Acetobacter turbidans IFO-3225 metilészter 4,2 A termék Rf-értéke a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint 0,77 (adszorbens: szüikagél, futtatószer: 70%-os vizes etanol). 5 11. példa Acetobacter aurantium IFO-3245 és Xanthomonas oryzae IFO-3995 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott 0 tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A 5 szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% 1-ciklohexenilglicin-metilésztert és 2% 7-amino-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az 0 elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-(a-amino-r-ciklohexenüacetamido)-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsavat („L" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatároz-5 zuk. A kapott eredményeket a 8. táblázatban foglaltuk össze. 8. táblázat a képződött „L" jelű Mikroorganizmus vegyület mennyisége, mg/ml Acetobacter aurantium IFO-3245 3,8 Xanthomonas oryzae IFO-3995 8,2 Az „L" jelű termék Rf -értéke a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint 0,85 (adszorbens: szüikagél, futtatószer: 70%-os vizes etanol). 12. példa A 9. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközet tartalmazó 3 edénybe oltjuk át és a tápközeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással ' elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd a szuszpenzióhoz 3 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% ciklohexflglicin-etüésztert és a) 2% 7- amino-cefalosporánsavat vagy b) 2%7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat vagy c) 2% 7-amino-3-metoximetfl-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 Cc -on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 9. táblázatban tüntettük fel. 9
