167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására
19 167968 20 9.táblázat Mikroorganizmus a képződött cefalosporin-származék mennyisége, mg/ml M N 0 Acetobacter xylinum IFO-3144 Acetobacter turbidans IFO-3225 Acetobacter pasteurianus IFO-3223 Pseudomonas melanogenum IFO-12 020 Paeudomonas maltophila IFO-12 690 Xanthomonas citri IFO-3835 Xanthomonas oryzae IFO-3995 Mycoplana dimorpha IFO-13 213 1,8 0,7 1,1 10 2.5 2,2 1,5 2,8 2,1 1,8 0,9 0,8 1,0 15 0,5 0,4 0,8 1,8 0,3 0,9 4.6 3,5 4,2 1,0 0,3 0,8 ciklohexil-7-amino-a képződött Mikroorganizglicin-alkilcefém cefalosporin mus észter •zármazék származék mennyisége és minősége Xanthomonas oryzae IFO-3995 metilész„b" 5,2 mg/ml ter „N" Pseudomonas melanogenum IFO-12 020 metilész„c" 1,8 ml/ml ter O" 20 25 30 Megjegyzés: M: Az „a" összetételű reakcióelegyben képződött 7-(a-amino-ciklohexilacetamido)-cefalosporánsav. N: A „b" összetételű reakcióelegyben képződött 7-(a-amino-ciklohexüacetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsav. 0:A „c" összetételű reakcióelegyben képződött 7-(a-amino-ciklohexilacetamido)-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsav. 35 13. példa A 10. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközeg- 40 be oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 45 0,1 N dikálium-dihidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% 10. táblázatban megadott ciklohexilglicinalkilésztert és 2% 10. táblázat szerinti 7-aminocefémszármazékot tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegye- 50 ket rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékokat bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációjukat biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 10. táblázatban ismertetjük. 55 10. táblázat Mikroorganizmus ciklohexil- 7-aminoglicin-alkil- cefém észter származék Acetobacter turbidans IFO-3225 10 a képződött cefalosporin származék mennyisége és minősége 60 etilészter 3,4 mg/ml „M" 65 Megjegyzés: a) 7-aminocefalosporánsav, b) 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsav, c) 7-amino-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsav, M) 7 -(a-aminociklohexilacetamido)-cefalosporánsav, N) 7-(a-aminociklohexilacetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsav, O) 7-(a- aminociklohexilacetamido)-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsav. 14. példa Ali. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 3 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 0,4% fenilglicinmetilésztert és 0,2% 7-aminocefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre alítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen kresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-(a-aminofenilacetamido)-cefalosporánsavat („A" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket all. táblázatban adjuk meg. 11. táblázat a képződött „A" jelű veMikroorganizmus gyület menynyisege mg/ml Arthrobacter simplex IFO-12 069 0,03 Arthrobacter oxydans IFO-12 138 0,02 Proteus mirabilis IFO-3849 0,02 Proteus morganii IFO-3848 0,02 Corynebacterium tritici IFO-12 164 0,03 Flavobacterium capsulatum IFO-12 533 0,04 Clostridium butyricum IFO-3847 0,05 Clostridium acetobutyricum IFO-3346 0,04 Spirillum metamorphum IFO-12 012 0,03 BAcülus subtilis IFO-3035 0,03
