167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására

15 167968 16 Megjegyzés: D: Az „a" összetételű reakcióelegyben képződött 7-[a- amino-a-(4-hidroxifenü)-acetamido]- -cefalosporánsav. E:"A „b" összetételű reakcióelegyben. képződött 7-[a-amino-a-(4-hidroxi- 5 fenil)-acetamido]-3-dezacetoxi-cefalosporánsav. F: A „c" összetételű reakcióelegyben képződött 7-[a-amino-(4-hidroxifenil)-acetamido]-3-metoximetil-3-ce- ^ fém-4-karbonsav. 6. példa Az 5. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét olyan edénybe oltjuk át, amely 30 ^ ml I. tápközeget tartalmaz, majd az edényeket 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. Ezután a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6-os pH-jú 0,05 M foszfát-pufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpen- 20 ziókhoz 3 ml olyan 0,1 N vizes dikálium-hidrogénfoszfát-oldatot adunk, amely 4% 3,5-diklór-4-hidroxifenil-glicin-metilésztert és a) 2% 7-aminocefalosporánsavat vagy b) 2% 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat vagy 25 c) 2% 7-amino-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldatok pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyeket rázás közben 40 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a képződött cefalosporin-származékokat 30 bioautográfiával azonosítjuk és mennyiségüket biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket az 5. táblázatban ismertetjük. 5.táblázat Mikroorganizmus a képződött cefalosporin-származék mennyisége mg/ml G H I napos tenyészetét 3 olyan edénybe oltjuk át, amely 30 ml I tápközeget tartalmaz, majd az edényeket 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. Ezután a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6-os pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd 30 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatban szuszpendáljuk, amely 4% ciklohexenilglicin-metilésztert és a) 2% 6-aminocefalosporánsavat, b) 2% 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat vagy c) 2% 7-arnino-3-metoximet'il-3-cefém-4-karbonsaT vat tartalmaz. Az oldatok pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyeket rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a képződött cefalosporin-származékokat bioautográfiával azonosítjuk és mennyiségüket biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 6. táblázatban tüntettük fel. 6.táblázat 35 40 Acetobacter xylinum IFO-3144 0,1 0,1 0,1 Acetobacter aurantium IFO-3245 0,1 0,1 0,1 45 Xanthomonas oryzae IFO-3995 0,2 0,1 0,2 Mycoplana dimorpha IFO-13240 0,1 0,1 0,1 — 50 Megjegyzés: G: az „a" összetételű reakcióelegyben képződött 7-[a-amino-a-(3,5-diklór-4-hidroxi-fenil)-acetamido]-cefalosporánsav. H:A „b" reakcióelegyben képződött 55 7-[a-amino-a-(3,5-diklór-4-hidroxifenil)-acetamido]-3-dezacetoxicefalosporánsav. I: A „c" összetételű reakcióelegyben képződött 7-[a-amino-a-(3,5-diklór- 60 4-hidroxifenü)-acetamido]-3- metoximetil-3-cefém-4-karbonsav. 7. példa A 6. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 65 Mikroorganizmus a képződött cefalosporin mennyisége, mg/ml J K L Acetobacter xylinum IFO-3288 1,3 1,6 0,8 Acetobacter pasteurianus IFO-3223 6,8 4,6 5,2 Acetobacter turbidans IFO-3225 7,2 4,4 4,0 Acetobacter aurantium IFO-3245 2,1 0,8 1,1 Pseudomonas me-lanogenum IFO-12020 2,3 2,5 1,5 Pseudomonas maltophila IFO-12690 0,9 1,2 0,7 Xanthomonas oryzae IFO-3995 7,5 7,2 7,0 Mycoplana dimorpha IFO-13213 1,4 2,0 1,2 Megjegyzés J: J: Az „a" összetételű reakcióelegyben képződött 7-(ö-amino-r-ciklohexenilacetamido)-cefalosporánsav. K:A „b" reakcióelegyben képződött 7 - ( a - a minő-1 '-ciklohexenilacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsav. L: A „c" reakcióelegyben képződött 7 - ( a - a minő-1 '-ciklohexenilacet amido)-^-metoximetil-3-cefém-4-karbonsav. 8. példa Acetobacter pasteurianus IFO—3223 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C -on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% ciklohexenilglicin-metilésztert és 2% 7-aminocefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen e