167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására

13 167968 14 ezután rázás közben további 20 órán keresztül 28 C°-on inkubáljuk, majd a sejteket centrifugálással elkülönítjük. A sejteket 500 ml 6-os pH-jú 0,05 M foszfátpuff érrel mossuk, majd a foszfát puffer 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenziókhoz 50 ml olyan 0,1 N vizes dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% fenilglicin-metüésztert és 2% 7-aminocefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6-os értékre állítjuk be. Az elegyeket 30 percen keresztül 37 C°-on rázatjuk, majd a képződött 7-(a-aminofenilacetamido)-cefalosporánsavat („A" jelű vegyület) bioautográfíával azonosítjuk és mennyiségét biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 2. táblázatban tüntettük fel. 2. táblázat Mikroorganizmus a mikroorganizmus tenyésztésére alkalmazott közeg Xanthomonas oryzae Escherichia coli Escherichia coli var. communior Staphylococcus aureus IFO-3995 IFO-3543 IFO-3550 IFO-3060 I II III I 8,8 3,5 4,3 1,5 3. példa Acetobacter pasteurianus IFO-3223 3 napos tenyészetével 20 ml I. tápközeget oltunk be, majd az elegyet 1 napon keresztül 28 C°-on rázatjuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és 20 órán keresztül rázás közben 28 C°-on tenyésztjük. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük és 500 ml 6-os pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk. A mosott sejteket a fenti puffer 50 ml-ében szuszpendáljuk, majd a szuszpenzióhoz hozzáadunk 50 ml olyan 0,1 N vizes dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot, amely 4% fenilglicin-etilésztert és 2% 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2 N sósavval előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet 30 percen keresztül 37 C°-on rázatjuk. A reakcióelegy a fenti idő után 6,8 mg/ml 7-(oaminofenilacetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat tartalmaz. A terméket autobiográfiával azonosítottuk, mennyiségét biológiai módszerrel határoztuk meg. gén-foszfát-oldatot, amely 4% 3. táblázatban megadott fenilglicin-alküésztert és 2% 7-amino-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítjuk 5 be. Az elegyet 30 percen keresztül rázás közben 37 C°-on inkubáljuk, majd a reakcióelegyben keletkezett 7-(a-aminofenilacetamido)-3-metoximetil-3-cefém4-karbonsavat („C" jelű vegyület) bioautográfíával azonosítjuk és mennyiségét biológiai módszerrel megha-10 tározzuk. A kapott eredményeket a 3. táblázatban ismertetjük. 3. táblázat 15 Mikroorganizmus fenilglicinalkilészter a képződött „A" jelű cefalosporinszármazék mennyisége 20 a képződött „C" jelű vegyület menynyisége (mg/ml) Acetibacter turbidans IFO-3225 metilészter 5,8 Acetobacter aurantium IFO-3245 etilészter 4,8 25 5. példa A 4. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét olyan edénybe oltjuk át, amely 30 ml I. tápközeget tartalmaz, majd az edényeket 20 30 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. Ezután a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6-os pH-jú 0,05 M foszfát-pufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenziókhoz 3 ml olyan 0,1 N vizes dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot 35 adunk, mely 4% hidroxifenilglicin-metilésztert és a) 2% 7-aminocefalosporánsavat, b) 2% 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat vagy c) 2% 7-amino-3-metoximetil-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldatok pH-ját 2N sósavoldattal 40 előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyeket rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a képződött cefalosporin-származékokat bioautográfíával azonosítjuk és mennyiségüket biológiai módszerrel meghatározzuk. 45 A kapott eredményeket a 4. táblázatban tüntettük fel. 4. táblázat 50 Mikroorganizmus a képződött cefalosporin-származék mennyisége mg/ml D E F 55 4. példa Acetobacter turbicans IFO-3225 és Acetobacter aurantium IFO-3245 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk be, majd a közeget 1 napon keresztül 28 C -on rázatjuk. A kapott tenyészeteket 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és rázás közben 20 60 órán keresztül 28 C -on inkubáljuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0-os pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd az említett puffer 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenziókhoz . hozzáadunk 50 ml olyan 0,1 N vizes dikálium-hidro-65i Acetobacter pasteurianus Acetobacter turbidans Xanthomonas citri Mycopkna dimorpha Psudomonas maltophila IFO-3223 0,8 0,5 0,6 IFO-3225 0,7 0,7 0,6 IFO-3835 1,2 1,4 1,0 IFO^13240 0,9 0,5 0,8 IFO-12690 0,7 0,4 0,6 7