167919. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-25822 jelű antibiotikum- komplex komponensei előállítására

11 167919 12 .zött beteg kezelésére előnyösen az egyik komponenst, például a B-t használjuk. Az A 25822 antibiotikumokat előnyösen használhatjuk dermatofiták okozta fertőzések gyógyítására is. A megtámadott bőrfelületet például az egyik A 25822 komponens vizes oldatával kezeljük, amely vizes oldat az illető kórokozóval szemben a legkisebb növekedésgátló koncentrációnak megfelelő ható•anyagmennyiségnél többet tartalmaz. A gombaellenes hatású oldatokat permetként vagy öblítőfolyadékként, esetleg tamponozással juttatjuk a fertőzött bőrfelületre. Az A 25822 antibiotikumok előnyösen használhatók a gombafertőzések terjedésének megakadályozására is, például oly módon, hogy az oldatokat fürdőkben, zuhanyozókban és hasonló helyeken használjuk. Az A 25822 jelű antibiotikumokat termelő mikroorganizmust a szokásosan használt sorozathígításos módszerrel, Wyomingban, a Grand Tetőn National Park-ban gyűjtött földmintából izoláltuk. Ahogy azt a következőkben leírjuk, a törzs rendszertanilag a Geotrichum flavo-brunneum Miilet és mt. egy űj törzsének bizonyult. Az A 25822 antibiotikumokat termelő új törzs a konidiumos gombák közé tartozik, amelyek micéliuma szeptált. A micéliumok szegmentációjával kialakuló konidiumok vastag falúak, rövidek, henger alakúak és végeik csonkák. Kulturális tulajdonságok Burgonya-dextróz agar: 18 napos, szobahőmérsékleten inkubáció után 7,8 cm átmérőjű telepek; felületük egyformán halvány csokoládébarna színű (E6/13 Maerz és Paul munkájában: A Dictionary of Color, 1950, McGraw-Hill, N. Y.) A kolóniák alacsonyan növő, fénytelen, egymás köré csavarodott hifákból állnak. A telepek hátoldala fényes karamellarany színű, az agárban oldódó színanyaggal. Kukoricaliszt-agar: vékony telepek, a legtöbb a táptalajban süllyesztett; színük lehet színtelentől halványsárgán keresztül halványbarnáig. Morfológiai tulajdonságok: A vegetatív hibák vagy színtelenek vagy világos színűek, feltűnő szeptumokkal. A fenti két táptalajon kétféle reproduktív sejtet figyelhetünk meg: 1. artrospórákat; ezek nagysága 4,0-9,0 X 2,2^,0 mikron között változik, csonka végűek, sima felszínűek, gyengén színezettek, a légmicéliumok vagy az öreg hifák, vagy mindkettő fragmentációjakor kerülnek a szabadba, amikor láncokban együtt maradnak; ezek a láncok nem elágazóak, vagy ritkán egyszer vagy kétszer elágaznak; általában 90—100 mikron hosszúak; 2. interkaláris klamidospórákat; vastag falú, sima felszínű, színtelen vagy sárga színű, gömbölyűhöz közelálló-ovális alakú, 9X7 mikron-21 X 11 mikron, átlagosan 14-16 X 9-11 mikron nagyságú sejtek. A fenti rendszertani tulajdonságok alapján az A 25822 antibiotikumokat termelő organizmus a Geotrichum flavo-brunneum Miller és mt. (Miller és mt.-: Mycologia 49, 779-808, 1957) egy új törzsének tekinthető. A vizsgált törzs jellemzője, hogy sok interkaláris klamidospórát termel, ebben különbözik a fent idézett helyen leírt G. flavo-brunneumtól, ugyanakkor minden más tulajdonsága megegyezik annak tulajdonságaival. Az A 25822 jelű antibiotikumokat termelő törzset letétbe helyeztük az Agricultural Research Service, 5 Northern Utilization Research and Development Division, Department of Agriculture, Peoria, Illinois állandó törzsgyűjteményében, ahol az az NRRL 3862 számot kapta és ahonnan kívánságra elküldik. Az A 25822 antibiotikumkeverék előállítására a 10 termelő törzset többféle táptalajon tenyészthetjük, ugyanis az többféle energiaforrás hasznosítására képes, így például, az organizmus szénforrásaként különböző szénhidrátokat adhatunk a táptalajba. Hasonlóan, különböző nitrogénforrásokat, többek 15 között aminosavakat, desztillációs extraktumokat és hasonló anyagokat használhatunk. A gazdaságos szintű termelés, a legjobb kitermelés és az antibiotikum könnyű elkülönítése érdekében előnyösen bizonyos összetételű táptalajt használunk. Szénhidrátként elő-20 nyösen melaszt használunk, bár glükózt és szacharózt is adagolhatunk. Előnyösen nitrogénforrás a pepton, szójaliszt, aminosavak stb. Ahogy az antibiotikumok fermentációs úton való előállításakor általában, az A 25822 antibiotikumok előállításakor szintén adagol-25 hatunk a táptalajba szervetlen sókat. Ilyen sók lehetnek többek között a nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, foszfát-, klorid- vagy karbonátionokra stb. disszociáló sók. Az A 25 822 jelű antibiotikumokat termelő mik-30 roorganizmusok fejlődéséhez elengedhetetlenül szűk-, séges (esszenciális) elemeket szintén hozzáadjuk a táptalajhoz. Ezek az elemek általában csak nyomnyi mennyiségben szükségesek, és általában mint szennyeződések jelen vannak a táptalaj többi alkotórészében. 35 Az A 25822 antibiotikumokat termelő organizmus különböző körülmények között képes növekedni. így a törzs különböző táptalajokon, különböző kezdeti pH-értékek mellett is nő. Ugyanakkor a fermentáció kezdetén a táptalaj pH-ját 6 és 8, előnyösen 6 és 7 40 közé állítjuk be. Az organizmus növekedése közben a táptalaj pH-ja az eredeti értékről fokozatosan 7,5-re vagy magasabb értékre emelkedik. A táptalaj pH-ja a fermentáció végén legalábbis részben a táptalaj kezdeti pH-jának, a táptalaj pufferkapacitásának és a növeke-45 dési szakasz hosszának a függvénye. A találmány szerinti eljárás során használt termelő organizmus különböző táptalajokon képes növekedni és antibiotikumokat szintetizálni. Az organizmus növekszik agáron, rázott tenyészetben, vagy nagymé-50 retű fermentorokban is. A nagy térfogatban végzett fermentációkhoz előnyösen süllyesztett, aerob fermentációs körülményeket biztosítunk. Viszonylag kismennyiségű antibiotikum előállítására rázott tenyészeteket vagy üvegedényben felületi tenyészeteket 55 oltunk. Ha az A 25822 jelű antibiotikumok előállítására süllyesztett, aerob fermentációt indítunk, a következők szerint járunk el: a termelő organizmust ferdeagaron tenyésztjük, az 60 elkülönített spórákkal vegetatív inokulumot oltunk A beoltott vegetatív tenyészetben az organizmus gyors növekedése figyelhető meg. A megfelelő számú életképes sejtet tartalmazó vegetatív inokulummal fermentort oltunk. A köztes szakaszt jelentő vegeta-65 tív inokulum használata azért előnyös, mert ebben az 6