167856. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminopenicillinek előállítására
21 167856 22 C) kísérlet All. táblázatban felsorolt mikroorganizmusokat az A., illetve B. kísérletben megadott módon tenyésztjük. A kapott tenyészetek optikai sűrűségét all. táblázatban közöljük. Az így kapott sejtek jelenlétében 6-amino-penicillánsavat D-fenilglicin-metilészterrel reagáltatunk. A reakciót az alábbi körülmények között végezzük: Az Escherichia coli N.C.I.B. 8743 mikroorganizmustörzs esetén 1,0% 6-amino-penicillánsavat, ekvimoláris mennyiségű (0,93%) D-fenilglicin-metilészter-hidrokloridot, ekvimoláris mennyiségű (0,53%) fenilecetsavat és a 0,05 mólos foszfátpuffer-oldatban (pH = 7,0) előállított tenyészet optikai sűrűségének tízszeresét kitevő mennyiségű mikroorganizmus-sejtet tartalmazó elegyet készítünk, és az elegyet 120 percig 34 C°-on inkubáljuk. A találmány szerinti eljárásban felhasznált mikroorganizmus-törzsek esetén 0,50% 6-amino-penicillánsavat, ekvimoláris mennyiségű (0,47%) D-fenilglicin-metilészter-hidrokloridot, ekvimoláris mennyiségű (0,32%) fenilecetsavat és a 0,2 mólos citrát-foszfát pufferoldatban (pH = 5,5) előállított tenyészet optikai sűrűségének ötszörösét kitevő mennyiségű mikroorganizmus-sejtet tartalmazó elegyeket készítünk, és az elegyeket 120 percig 37 C°-on inkubáljuk. Az inkubálás során időről időre meghatározzuk a képződött a-amino-benzil-penicillin, illetve penicillin G mennyiségét. A meghatározást biológiai úton végezzük, Bacillus subtilis PCI 219 vizsgálati mikroorganizmus felhasználásával (Antibiotics and Chemotherapy 3, 50— 54 (1953)]. Az eredményeket all. táblázatban közöljük. A táblázatban alkalmazott jelölések jelentése a következő: (a) mikroorganizmus (b) a tenyészet optikai sűrűsége 260 mjji hullámhossz 9n (c) inkubálás ideje, perc (d) képződött a-amino-benzil-penicillin mennyisége, mg/ml (e) képződött penicillin G mennyisége, mg/ml (f) pH inkubálás után. A táblázat adataiból megállapítható, hogy a találmány szerinti eljárásban felhasznált mikroorganizmusok nagymértékben szubsztrátumspecifikusak, azaz az adott körülmények között nagymennyiségű a-amino-benzil-penicillint termelnek, penicillin G-t viszont egyáltalán nem termelnek. Az Escherichia coli N.C.I.B. 8743 törzs ezzel szemben nem szubsztrátumspecifikus. 11. táblázat (a) (b) (c) (d) (e) (f) Escherichia coli 5,40 15 0,02 0,10 N.C.I.B. 8743 30 0,05 0,42 45 0,10 0,51 60 0,06 0,38 90 0,05 0,40 120 0,05 0,40 6,80 (a) (b) (c) (d) (e) (f) Acetobacter sp. IFO 13209 6,00 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,30 Mycoplana dimorpha IFO 13213 4,80 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,09 Xanthomonas sp. IFO 13215 6,20 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 4,90 Protaminobacter alboflavus IFO 13221 3,90 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,20 Xanthomonas citri IFO 3781 4,80 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,05 Acetobacter turbidans IFO 3225 3,80 15 30 45 60 90 120 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 >1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,00 50 15. példa 100 térfogatrész „F" táptalajt (az összetételt a 8. példában közöltük) Xanthomonas oryzae IFO 3995 törzzsel oltunk be, és az elegyet 24 órán át rázás közben 55 28 C°-on inkubáljuk. A sejteket centrifugálással elkülönítjük a folyadékfázistól, és 100 térfogatrész 0,1 mólos foszfátpuffer-oldattal (pH = 6,0) mossuk. A sejteket 100 térfogatrész fenti foszfátpuffer-oldatban szuszpendáljuk, a szuszpenzióhoz 60 2 súlyrész D-oc-(l ,3-ciklohexadienil)-glicin-metilésztert és 1 súlyrész 6-amino-penicillánsavat adunk, pH-ját In nátriumhidroxid-oldattal 6,0-ra állítjuk, és keverés közben 2 órán át 37 Cc -on inkubáljuk. 0,8 súlyrész 6--(D-<x-amino-oc-)l,3-ciklohexadienil(-acetamido)-penicil-65 lánsavat kapunk. 11
