167786. lajstromszámú szabadalom • Továbbfejlesztett eljárás rifamicin B mikrobiológiai előállítására

7 167786 8 Táptalaj Streptomyces mediterránéi ATCC 13 685 Streptomyces mediterránéi M 18 (ATCC 21 789) Táptalaj Streptomyces mediterránéi ATCC 13 685 Streptomyces mediterránéi M 18 (ATCC 21 789) Tirozinagar (Gottlieb és Shirling 7. táptalaja) Kalcium-malát-agar Zselatin Nitrátos folyékony táptalaj Gyenge vekedés. no-Jó növekedés, a vegetatív micélium színtelen. Légmicélium rózsaszínes árnyalatú fehér színű. Oldódó színanyag nincs. A kalcium-malát részleges emésztése figyelhető meg. Színanyag nincs. Gyenge és nem teljes elfolyósítás. Felületi növekedés, rózsaszínű légmicéliumok. Nitrátredukció nincs. A táptalaj színe sárgássá válik. Igen jó növekedés, a telepek felszíne barázdált. A vegetatív micélium mély narancssárga színű, barnás árnyalattal. Légmicélium nem figyelhető meg. Az oldódó színanyag színe sárga. A tirozináz-próba erősen pozitív. Jó növekedés, a telepek felszíne sima, A vegetatív micélium színe világos narancs. Légmicélium nem fejlődik. Világos citromsárga színű oldódó színanyag. A kalcium-malát enyhe emésztése figyelhető meg. Színanyag nincs. Pozitívnak értékelhető elfolyósítás. Felületi növekedés, rózsaszínű légmicéliumok. A nitrátot nitritté redukálja. A táptalaj színe sárgássá válik. Lakmusztej 10 Fölözött-15 tej-agar 20 25 Pepton-30 -élesztőkivonat-vasagar (Gottlieb és Shirling 6. 35 táptalaja) 40 45 Peptonizáció vagy koaguláció nem figyelhető meg. Gyenge alkalikus reakció. Igen jó növekedés, a telepek felszíne sima. A vegetatív micélium színe narancssárga. Kazeinhidrolízis: pozitív. Rózsaszínű légmicélium. Oldódó színanyag nincs. Közepes növekedés, a telepek felszíne sima. Színtelen vegetatív micélium. Elvétve fehéres színű légmicélium. Oldódó színanyag nincs. Kénhidrogéntermelés nem észlelhető. Koaguláció és peptonizáció nem figyelhető meg. Igen jó növekedés, a telepek felszíne sima. A vegetatív micélium színe narancssárga. Aranysárga színű oldódó színanyag. Légmicélium nem fejlődik. A kazein-hidrolízis erősen pozitív. Közepes növekedés, vékony, sima felületű telepek. Színtelen vegetatív micélium. Légmicélium nem fejlődik. Oldódó színanyag nincs. Kénhidrogén-termelés nem észlelhető. A kísérletekben a színmeghatározáskor Maerz 50 és Paul módszerét követtük. (A Dictionary of Colour, McGraw-Hill, Inc. N.Y. 1950.) A találmány szerinti eljárást a következőkben példával szemléltetjük. A szűrt tenyészlé rifamicin B-tartalmát a Pas- 55 qualucci és munkatársai által [Journal of Pharmaceutical Sciences, 59, 685 (1970)] kidolgozott differenciál-spektorofotométerre méréssel határozzuk meg. A rifamicin-komplex mennyiségét a tenyész- 60 lében a következőképpen határozzuk meg: a tenyészléből vett kismennyiségű minta pH-ját sósavval 2,0-re állítjuk be, majd etilacetáttal extraháljuk. A szerves oldószeres extraktumot elkülönítjük és 7,38-as pH-jú foszfát-pufferral ext- 65 raháljuk. A rifamicin B így a foszfát-pufferben oldódik, míg a rifamicin-komplex a szerves oldószeres fázisban marad. A kiextrahált etilacetát rifamicin-komplex tartalmát 460 m|x-os hullámhosszon, 1% aszkorbinsavat tartalmazó etilalkohollal megfelelően hígított mintával, spektrofotometriás úton határozzuk meg. A táptalajok előállításánál a DIFCO LABORATORIES, Inc. termékeit használtuk. 1. példa A Streptomyces mediterránéi ATCC 18 685 ipari törzset és az M 18 jelű mutáns törzset Bennett-agaron, 28 C° hőmérsékleten 6—8 napon át 4