167786. lajstromszámú szabadalom • Továbbfejlesztett eljárás rifamicin B mikrobiológiai előállítására
167786 10 tenyésztjük. Egy ferde-agarról nyert spóraszuszpenzió fele mennyiségével 100 ml, a következő összetételű vegetatív tenyészetet oltjuk: Húskivonat Élesztőkivonat Pepton Kazein-hidrolizátum NaCl Víz 5 g 5 g 5 g 3 g 1,5 g 1 liter A táptalaj pH-ját nátriumhidroxiddal 7,3-re állítjuk be. Az inkubálást 500 ml-es Erlenmeyerlombikban, rázóasztalon, 28 C° hőmérsékleten 72 órán át végezzük. Ezt követően a vegetatív tenyészettel (5%) főfermentációs táptalajt oltunk. Kétféle főfermentációs táptalajt használunk. Az RFB 744 jelű egy szintetikus táptalaj. Összetétele a következő: Glükóz 96 g (NH4 ) 2 S0 4 15 g KH2 P0 4 2 g CaC03 17 g MgS04 • 7H 2 0 1 g CUSOÍ • 5H2 0 0,0033 g FeS04 •7H 2 0 0,01 g ZnS04 -7H 2 0 0,05 g MnS04 • 4H 2 0 0,04 g CoCl2 • 6H 2 0 0,002 g (NH4 ) 6 Mo 7 02 4 -4H 2 0 0,001 g Nátrium-dietilbarbiturát 2 g Víz 1 li1 A táptalaj pH-ját sterilezés előtt 6,8-ra állítjuk be; a pH sterilezés után 6,3. Az RFB 2244 jelű táptalaj összetétele: 126,5 Glükóz CaC03 Mogyoróliszt Szójaliszt (NH4 ) 2 S0 4 MgS04 • 7H 2 0 FeS04 • 7H 2 0 CuS04 •5H 2 0 ZnS04 •7H 2 0 MnS04 • 5H 2 0 CoCl2 • 6H 2 0 (NH4 ) 6 Mo 7 0 24 • 4H 2 0 Nátrium-dietilbarbiturát Víz g 10 15 20 25 30 35 40 45 9,5 g 25 g 10 g 1 g 1 g 0,01 g 0,0033 g 0,050 g 0,004 g 0,002 g 0,001 g 1,5 g 1 liter 65 60 A táptalaj pH-ját sterilezés előtt 7,4-re állítjuk be (15%-os nátriumhidroxid); a pH sterilezés után 6,2—6,3. A tenyésztést 500 ml-es, 50 ml táptalajt tartalmazó Erlenmeyer-lombikban végezzük. Habzásgátlóként 0,4% Antifoam A-t használunk. A törzsek termelőképességének összehasonlítására nátrium-dietilbarbiturátot nem tartalmazó táptalajokat is készítünk. A fermentációs körülményeket és a tenyészlé hatóanyag-tartalmát (rifamicin-komplex és rifamicin B) a 3. és 4. táblázatban adjuk meg. 3. táblázat Rifamicin B-tartalom (y/ml) barbiturát- barbiturát tal nélkül Streptomyces mediterránéi ATCC 13 685 2210 M 18 mutáns (ATCC 21 789) 2290 <390 2240 Fermentációs táptalajként az RFB 2244 jelű táptalajt használjuk, amely vagy nem tartalmaz, vagy 1,5 g/l mennyiségű nátrium-dietilbarbiturátot tartalmaz. A fermentációs hőmérséklet: 28 C° ; fermentációs idő: 190 óra. Az ATCC 13 685 jelű törzzsel előállított legfeljebb 390 v/ml-nyi mennyiségű rifamicin B a rifamicin-komplexszel mért összaktivitás része. 4. táblázat Törzs Rifamicin B (y/ml) Rifamicin-komplex ( /ml) Barbiturat- Barbitu- Barbitu- Barbitutal rát nél- ráttal rát nélkül kül Streptomyces medi-50 terranei ATCC 13 685 344 M 18 mutáns 55 (ATCC 21 789) 580 <107 <10 99 513 <10 <10 Fermentációs táptalajként az RFB 744 jelű táptalajt használjuk, amely vagy nem, vagy 1,5 g/l mennyiségű nátrium-dietilbarbiturátot tartalmaz. Fermentációs idő: 144 óra; a tenyésztést (rázóasztalon) 28 C° hőmérsékleten végezzük. Az M20 ATCC törzs az M18 mutánssal csaknem azonos termelési értékeket ad. 5
