167655. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-terminálisán alfa-aminooxikarbonsavat tartalmazó, új, ACTH hatású polipeptidek előállítására

27 167655 28 bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Szűrés éteres mosás, szárítás után 1,96 g (85%) H-D-Lys (BOC)-NH2

.oxalátot kapunk. Op.: 163-165 C°. Elemzés a C13H25N3O7 összegképlet alapján: számított: C 46,6%; H 7,5%; N 12,5%; talált: C 46,2%; H 7,3%; N 12,9%. 3. lépés: Z-Lys(BOC)-Lys(BOC) Lys(BOC)-NH2 -Lys(BOC)-Lys(BOC)-D-3,24 g (3,0 mmól) Z-Lys(BOC>Lys(BOC) -Lys (BOC>Lys(BOC)-N2

H

3

-ot feloldunk 15 ml dimetilformamidban. A -20 C°-ra hűtött oldatba keverés közben becsepegtetünk 3 ml (12 mmól) 4 h etilacetátos sósav-oldatot, majd 0,43 ml (3,6 mmól) terc-butilnitritet. A reakcióelegyet 5 percig -10 C°-on tartjuk, majd -20 C°-ra hűtjük és hozzáadjuk 1,18 g (3,5 mmól) H-D-Lys(BOC)-NH2

.oxalát és 2,66 ml (15 mmól) diizopropiletilamin 10 ml dimetilformamidos oldatát. A reakcióelegyet 2 órán át -5 és 0 C° közötti hőmérsékleten, majd másnapig 0 C°-on tartjuk. Ezután az oldatot bepároljuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk. A nyers terméket metanol-víz 1:1 arányú elegyéből átkristályosítjuk. 2,25 g (59%) Z-Lys(BOC>Lys(BOC) -Lys(BOC> Lys(BOC)-D-Lys(BOC>NH2

-t kapunk. Op.: 191-192 C6

,-R|=0,73. 4. lépés: H-Lys(BOC)-Lys(BÓC) Lys(BOC)-NH2 -Lys(BOC)-Lys(BOC)-D-nátriumacetát 0,60 mg nátriumklorid 8,1 mg desztillált vízzel kiegészítve 1,0 ml-re. A megadott alkotórészekből injekciós oldatot készítünk, és 1,0 ml-es barna ampullákba töltjük, 5 majd sterilizáljuk. 11. példa 10 Szuszpenziós oldat összetétel: D-OSer^alfa^-32

ACTH 1,0 mg cinkklorid 5,30 mg nátriumhidrogénfoszfát 1,05 mg 15 nátriumklorid 2,00 mg benzilalkohol 10,00 mg 0,6 n nátriumhidroxid-oldat 8,6 pH--értékig desztillált vízzel kiegészítve 1,0 ml-re. A megadott alkotórészekből ismert módon szusz-20 penziót készítünk, amely elnyújtott hatást biztosít. 1,6 g (1,26 mmól) Z-Lys(BOC>Lys(BOC) -Lys(BOC>Lys(BOC)-D-Lys(BOC>NH2

-t 32 ml metanolban feloldunk és 0,3 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 1,4 g (98%) H-Lys(BOC>Lys(BOC) -Lys(BOC>Lys(BOC> D-Lys(BOC)-NH2

-t kapunk.

R\ = 0,45. 5. lépés: BOC-D-OSer-Tyr -Ser-Met-GMOBu^-His -Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC) -Pro-Val-Gly-Lys(BOC) -Lys (BOC)-Lys(BOC) -Lys(BOC)-D-Lys(BOC)-NH2 .HCl 0,398 g (0,20 mmól) BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met -GluíOBu^His-Phe-Arg-Trp -Gly-Lys(BOC>Pro-Val -Gly -OH.HCl-ot, 0,228 g (0,20 mmól) H-Lys(BOC) -Lys(BOC) -Lys(BOC>Lys(BOC>D-Lys(BOC>NH2

ot és 0,166 g (0,90 mmól) pentafluorfenolt 3 ml dimetilformamidban feloldunk és 0,063 g (0,30 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet 16 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet éterrel hígítjuk. A kivált terméket szűrjük, éterrel mossuk, vákuumban szárítjuk. 0,529 g (85%) védett nonadekapeptidamid-hidrokloridot kapunk. R| = 0,67. 25 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű új, ACTH-hatású polipeptidek H-X-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Y m or> — ebben a képletben X -OGly-, -OAla-, -D-OAla-, OServagy —D—OSer-csoportot és 35 40 45 50 -A-B-C-D általános képletű csoportot jelent, ahol A -Lys- vagy -Arg- csoportot, B -Lys- vagy -Arg- csoportot, Gly-, -Lys-, -D-Lys- vagy -Pro- csoportot és D -OH csoportot vagy -Val-Lys-Val-Tyr-Pro-E-F-G-Glu-K általános képletű csoportot jelent, és az utóbbi képletben E -Asp- vagy -Asn- csoportot, F -Gly- vagy -Ala- csoportot, G -Gly- vagy -Ala- csoportot és K 10. példa Injekciós oldat Összetétel: D-OSer1

-alfaja-32

ACTH jégecet 14 -OH vagy -Asp-Glu-Ser-Ala-OH csoportot képvisel —, 55 valamint savaddiciós sóik és amidjuk előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő, legalább a terminális aminooxicsoportján, valamint az oldallánc aminocsoportjai, adott esetben a terminális és az oldallánc karboxilcsoportjai védett (í) általános kép-60 létű polipeptidről - ahol X és Y a fenti jelentésűek -a védőcsoportokat lehasítjuk, és kívánt esetben a kapott vegyületet savaddiciós sójává vagy amidjává átalakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 65 módja olyan (I) általános képletű polipeptidek előállí-0,5 mg tására, amelyek képletében X -OGly-, -OAla- vagy 1,20 mg -OSer- csoportot jelent, és Y jelentése -Arg-Arg-Pro-