167530. lajstromszámú szabadalom • Eljárás xilosztaszin előállítására
9 167530 10 Részletesebben, abban az esetben, ha a tenyészlevet aktív szénnel, mint adszorbenssel tisztítjuk, a xilosztaszin alkalikus tartományban adszorbeálódik az eluálást viszont előnyösen vagy pH 4 és pH 5 közötti vízzel, vagy ugyanilyen pH-értékű vizes acetonnal vagy vizes alkohollal végezzük. A xilosztaszin ioncserélő gyantán is tisztítható. Ioncserélő gyantaként kationcserélő gyantát, például Amberlite IRC-50-et (Rohm and Haas Co.) használunk. Az eluálást vizes sav-, lúg- vagy sóoldattal foganatosítjuk. A fentiek szerint előállított nyers, por alakú xilosztaszin ioncserélő kromatográfíával tovább tisztítható. A kromatografálást például Dowex 1 x 2 (OH" -ciklus) (Dow Chemical Co.), Amberlite CG-50 (NH4+ .ciklus (Rohm and Haas Co.) vagy CM-Sephadex (NH4 + -ciklus) (Pharmacia Fine Chemicals, Sweden) stb, gyantákkal végezzük. Az adszorpciós kromatográfiás tisztítás után kapott eluátumokból a xilosztaszin például az oldat szárazra-párlásával különíthető el. A desztillációt előnyösen alacsony hőmérsékleten végezzük. Eljárhatunk úgy is, hogy az eluátumhoz vízzel elegyedő szerves oldószert adunk, amiután a kicsapódott hatóanyagot elkülönítjük. Ha a xilosztaszint tartalmazó eluátum pH-ját a desztilláció előtt vagy közben egy savval semleges értékre állítjuk be, úgy a xilosztaszint savas sójaként kapjuk meg. A jelenlevő xilosztaszin mennyiségét az előállítási eljárás bármely szakaszában az ismert módon, biológiai értékméréssel határozzuk meg. A biológiai értékmérést például Bacillus subtilis PCI 219 tesztorganizmust használva, papírkorongos-módszerrel foganatosítjuk. A találmány szerinti eljárással előállított új antibiotikum, a xilosztaszin fizikai-kémiai tulajdonságai a következők: A xilosztaszin bázikus jellegű vegyület. Mind a xilosztaszin, mind ennek hidrogénkloriddal vagy hidrogénszulfáttal képzett sója fehér színű, kristályos anyag. A xilosztaszin semleges vagy lúgos pH-jú oldatokban állandó, savas pH-jú oldatban bomlik. Olvadáspontja pontosan nem határozható meg, 150 C° és 180 C közötti hőmérsékleten habzás közben bomlik. A xilosztaszin vízben igen jól, metanolban gyengén, több szerves oldószerben, például acetonban, butanolban, etilacetátban, benzolban, hexánban, éterben stb. egyáltalán nem oldódik. A xilosztaszin ultraibolya adszorpciós spektrumában jellemző elnyelési maximum nem látszik, csupán végelnyelés figyelhető meg. A xilosztaszin infravörös abszorpciós spektrumában (káiumbromid tabletta) az aminoglükozid típusú antibiotikumokra jellemző hullámhosszakon a 3320, 2920, 1590, 1465, 1340, 1100 és az 1020 cm"1 -es hullámhosszaknál latszik elnyelési maximum. Ugyanakkor, mivel az 1652 cm"1-es hullámhossz mellett nem látszik elnyelési maximum, nyilvánvaló, hogy a xilosztaszin nem tartalmaz savamid-kötést. A xilosztaszin mágneses magrezonancia spektrumában (D2 0) a következő 5-értékek figyelhetők meg: 1,36 (q, IH, axiális metilén-proton), 2,13 (m, IH, ekvatoriális metilén-proton), 5,44 (IH, J=<1, 5 xilóz anomer-proton), 5,70 (d, IH J = 3-4, neózamin C anomer-proton). A xilosztaszin vizes oldatban meghatározott optikai forgatása: [a]&3 = +34°. A xilosztaszinrá a következő színreakciók jel-10 lemzőek: Pozitív színreakció ninhidrinnel, antronnal, pozitív Greig—Leaback és Molisch-reakció. Negatív színreakció Sakaguchi szerint, maltollal, ferrikloriddal, biurettal és negatív Ehrlich-reakció. 15 A xilosztaszin elemösszetételét és molekulasúlyát egy foszforpentoxid fölött, csökkentett nyomáson, 110 C° hőmérsékleten 20 órán át szárított mintából határoztuk meg. Elemanalízis: C 44,18%, H 7,58%, N 11,98%. 20 Molekulasúly (neutralizációs ekvivalens): 451. A szerkezetvizsgálatokból adódó molekulaszerkezet alapján a xilosztaszin tapasztalati képlete Q7H34N4O10 (számított elemösszetétel: C 44,93%, H7,54%, N 12,33%, molekulasúly 454,49). 25 A xilosztaszin Whatman 1. papírral, pH 9,5-ös, 0,025 mólos borát-pufferral, 2 KV/36 cm feszültségkülönbség mellett, 90 percen át végzett papírelektroforézis során a katódtói 5—6 cm-re vándorol. Abban az esetben, ha a xilosztaszint 0,4 mólos 30 metanollal készült hidrogénkloridban 22 C° hőmérsékleten, 6 napon át metanolizáljuk, metil-D-xilozid és neamin keletkezik, míg ha a xilosztaszint 0,5 normál kénsavban 90 C hőmérsékleten 6 órán át hidrolizáljuk, a hidrolizátumban D-xilóz 35 és neamin mutatható ki. A találmány szerinti eljárással előállított új antibiotikum, a xilosztaszin baktériumellenes spektrumát a 2. táblázatban adjuk meg. 40 2. táblázat A xilosztaszin agar-hígításos módszerrel meghatározott legkisebb növekedésgátló koncentrációi 45 Legkisebb Vizsgált organizmus növekedésgátló konc, gamma/ml 50 ; Escherichia coli IFO 3044 6,25 Shigella flexneri EW 10 12,5 Proteus vulgaris IFO 3045 50 Pseudomonas aeruginosa 55 IFO 3080 50 Staphylococcus aureus FDA 209P 6,25 Bacillus subtilis PCI 219 3,125 Bacillus cereus IFO 3466 50 60 Bacillus brevis IFO 3331 25 Sarcina lutea IFO 3232 25 Mycobacterium avium IFO 3153 1,6 Mycobacterium avium 65 (streptomicin-rezisztens) 3,125 5
