167411. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására
17 167411 18 5 a) példa Enzimatikus aktivitás értékek (NIPAB-teszt): Keverős edényben 1 liter 100-140 C° forrpont Kiindulási oldat: határú benzinben 1 g azo-izovajsavnitrilt oldunk és 1 óra hosszat 90 C°-on melegítünk. Ezután az 5 oldathoz 80 C°-on 95 g etilénglikol-dimetakrilát, 5 g maleinsavanhidrid és 1 g azo-izovajsavnitril keverékét 3 óra leforgása alatt hozzácsepegtetjük és további 2 óra hosszat azonos hőmérsékleten keverjük. 10 A polimereket leszívatjuk, benzollal és 30-50 C° közötti forrásponthatárú petroléterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. Hozam: 96 g 15 Térfogatsúly: 14 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 18,2 ml/g Fajlagos felület: 70m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 0,5 milliekvivalens/g. 20 5 b) példa 0,4 g 5 a) példa szerint előállított gyantát 40 mg 25 glutationnal 32 ml vízben 16 óra hosszat 6,3 pH-érték állandóan tartása mellett szobahőmérsékleten keverünk. A gyantát leszívatjuk és a 3 d) példa szerint mossuk és szárítjuk. 0,46 g gyantát kapunk, amely Dumas szerint meghatározva 0,9% nitrogént 30 tartalmaz. Ez 6,6% vagy 30,4 g glutation tartalomnak, vagyis a bevitt mennyiség 76%-ának felel meg. A gyantát leszívatjuk és a 3d) példa szerint mossuk és szárítjuk. 0,46 g gyantát kapunk, amely Dumas szerint meghatározva 0,9% nitrogént tartalmaz. Ez 6,6% vagy 30,4 g glutation tartalomnak, vagyis a bevitt mennyiség 76%-ának felel meg. 6 a) példa 62,5 g tetraetilénglikol-dimetakrilát, 37,5 g maleinsavanhidrid és 1 g azo-izovajsavnitril 150 ml butilacetátban és 1 liter 100-140 C° forráspont határú benzinben készült oldatát keverés közben 2 óra hosszat 70 C°-on, 2 óra hosszat 75 C°-on és 1,5 óra hosszat 90 C°-on polimerizáljuk. A polimereket leszívatjuk, 24 óra hosszat Soxhlet-féle extraktorban benzollal extraháljuk és vákuumban szárítjuk. Hozam: 77 g Térfogatsúly: 7,3 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 8,2 ml/g Fajlagos felület: 19,4 m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 4,0 milliekvivalens/g. 6 b) példa 55 60 Ha lg 6a) példa szerint előállított penicillin-acilázt tartalmazó hordozógyantát az 1 b) példával analóg módon reagáltatunk, akkor a következő eredményekhez jutunk: 65 Felülúszó rész és mosóoldatok: , Hordozógyanta a reakció után: 7 a) példa 107 E 28 E 55 E, amely megfelel a kiindulási aktivitás 51%-ának. 90 g tetraetilénglikol-dimetakrilát, 10 g maleinsavanhidrid és 1,0 g azo-izovajsavnitril 200 ml acetonitrilben készült oldatát 1000 ml 100-140 C° forrásponthatárú olyan benzinben szuszpendáljuk, amelyben 5g glicerin-mono- és di-oleát keverékét oldottuk fel. A reakciókeveréket szilárd gyöngyök képződéséig (kb. 2 óra hosszat) 60 C°-on, végül 20 óra hosszat 65 C°-on polimerizáljuk. A kapott polimert leszűrjük, háromszor benzolban és háromszor 30-50 C° forrásponthatárú petroléterben szuszpendálva tisztítjuk, majd vákuumban 50C°-on szárítjuk. Hozam: 94 g Átlagos részecske átmérő: ~0,35 mm Térfogatsúly: 2,8 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 3,5 ml/g Fajlagos felület: 3,4m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 1,5 milliekvivalens/g. 35 7 b) példa 1 g 7 a) példa szerint előállított penicillin-acilázt tartalmazó hordozógyantát az 1 b) példával analóg módon reagáltatva a következő eredményekhez 40 jutunk: Enzimatikus aktivitás értékek (NIPAB-teszt): 45 Kiindulási oldat: 107 E Felülúszó rész és 51 E mosóoldatok: Hordozógyanta a reakció 19 E, után: vagyis a kiindulási aktivitás 18%-a. 50 Példák a penicillin előállítására: 8. példa 79 g nedves, 687 E (NIPAB-teszt) aktivitású hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt, amelyet a 2. példa szerint penicillin-aciláznak etilénglikol-dimetakrilátból és maleinsavanhidridből álló kopolimerhez való rögzítése útján készítettünk, 129g G-kálium-penicillinnel (tisztasága 98%) 2000 ml vízben 9 óra hosszat 38 C"-on keverünk. A reakcióelegy pH-értékét eközben trietilamin folyamatos hozzáadásával 7,8 állandó pH-értéken tartjuk. A trietilamin-felvétel a reakció befejezése után megszűnik. A hordozóhoz kötött penicilHn-9
