167411. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására
19 1674H 20 -acilázt lecentrifugáljuk vagy leszívatjuk mindenkor 200 ml vízzel és 0,2 mólos 6,5 pH-értékű foszfátpufferrel utána mossuk, így újbóli adagoláshoz kész állapotban van. A szűrletet, ezenkívül a mosóoldatokat is, vákuumban 300 ml össztérfogatra bepárol- 5 juk. A 6-APS-t félig koncentrált sósavnak a 4,3 pH-értéknek megfelelő izoelektromos ponton való hozzáadásával 200 ml metil-izobutilketon jelenlétében kicsapjuk. 1 óra eltelte után a reakcióelegyet leszívatjuk, 200 ml vízzel, majd 200 ml 10 acetonnal utána kimossuk. A 6-APS-t vákuumban 40 C°-on szárítjuk, olvadáspontja 208 C°. A hozam 6-APS-re számítva 67,8 g, ez az elméletileg számított mennyiség 90,5%-a. A termék tisztasága 98%. 15 9. példa 60 g nedves, 673 E (NIPAB-teszt) aktivitású 20 hordozóhoz rögzített penicillin-acilázt, amelyet penicillin-aciláznak tetraetilénglikol-dimetakrilátból és maleinsavanhidridből álló kopolimerhez rögzítettünk az 1. példa szerint, 129 g G-kálium-penicillinnel 2000 ml vízben 9 óra hosszat 38 C°-on 25 keverünk. A pH-értéket trietilamin hozzáadásával 7,8 állandó értéken tartjuk. A további feldolgozást a 8. példával analóg módon végezzük. A hozam 6-APS-re számítva 65,3 g, ez az elméletileg számított mennyiség 87%-ának felel meg. 30 10. példa 35 Propilénoxiddal (Mn = 1000) készült 112 hidroxilszámú 18 dimetakrilsav-észtert, 2g maleinsavanhidridet és 200 mg azo-izovajsavnitrilt ampullába töltünk, a levegőt nitrogénnel kiszorítjuk és az ampullát leforrasztjuk. 40 Az ampullát 20 óra hosszat 65 C°-on melegítjük, majd feltörjük és a képződött polimértömböt felaprítjuk, háromszor acetonban szuszpendálva tisztítjuk, majd 50 C°-on és 50 torr nyomáson 45 megszárítjuk. Hozam: 18g. Térfogatsúly: 2,3 ml/g. Duzzadási térfogat vízben: 2,5 ml/g. 50 Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után: 1,6 milliekvivalens/g. 11-20. példa 55 Az 1. táblázatban megadott összetételű polimerizációs keveréket nitrogén-légkörben 20 óra hosszat 60 C°-on keverjük. A képződött por alakú polimert leszűrjük és háromszor toluolban, vala- 60 mint egyszer 30-50 C° közötti forráspont-hőmérsékletű petroléterben szuszpendáljuk, a szuszpenziós tisztítás után 50 C°-on vákuumban szárítjuk. A kapott polimer súlya — egyéb megjelölés hiányában — a táblázatban grammban értendő. 65 TMP-300-trimetakrilát = 1:1 arányú etilénoxidpropilénoxid kopolimerből (Mn = 300, hidroxilszáma 542) készült trimetakrilát, amelynél kiindulóanyagként trimetilol-propánt alkalmazunk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kopolimerhez rögzített vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a kopolimer monomerjeinek összsúlyára számítva A komponensként 0,1-70 súly% a,0-monoolefin kötést tartalmazó 4—5 szénatomos telítetlen dikarbonsavanhidridet és B komponensként 99,9-30 súly% di- és/vagy poliolok di- és/vagy poli(met)akrilátjait kicsapásos vagy gyöngypolimerizáció útján az anhidrid-csoportokkal szemben inert oldószerben vagy oldószerelegyekben 20-200 C° közötti hőmérsékleten gyökképző vegyületek jelenlétében 2-20 ml/g térfogatsúlyú, 1-400 m2 /g fajlagos felületű kopolimerré polimerizáljuk, majd a kapott kopolimert végül vizes szuszpenzióban fehérje-oldattal reagáltatva vízoldhatatlan fehérje-készítménnyé átalakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kopolimer A komponenseként maleinsav-, itakonsav- vagy citrakonsav-anhidrid kopolimerjét, míg a B komponensként 2-4 szénatomos diolok di(met)akrilátját és/vagy ilyen diolok 1-20 mól 2—4 szénatomos alkilénoxiddal képzett reakciótermékeit, illetve trimetilol-propén-trimetakrilátból álló kopolimert alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kopolimer A komponenseként a maleinsavanhidrid kopolimerjét és B komponensként az etilénglikol, dietilénglikol, trietilénglikol, tetraetilénglikol vagy hosszabb szénláncú polietilénglikolok olyan dimetakrilátjait alkalmazzuk, amelynek 1000-ig terjedő molekulasúlya van. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fehérjeként enzimet alkalmazunk. 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy fehérjeként enziminhibitort alkalmazunk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja vízoldhatatlan penicillin-aciláz készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a kopolimer monomerjeinek összsúlyára számítva A 0,1 -70 súly% a,j3-monoolefin kötést tartalmazó 4-5 szénatomos telítetlen dikarbonsavanhidridet és B 99,9-30 súly% di- és/vagy poliolok di- és/vagy poli(met)akrilátjait a kicsapásos vagy gyöngypolimerizáció útján az anhidrid-csoportokkal szemben inert oldószerekben 10
