167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
15 167369 16 Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe heptapeptidésztert [olvadáspontja 234° [áfa0 = -20° (c=l, dimetilformamidban)] 200 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 4 ml hidrazint, és 25°-on 24 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután 100ml-re kon- 5 centráljuk, 500 ml vizet adunk hozzá, a kivált anyagot szűrőn elválasztjuk, vízzel semlegesre mossuk, és foszforpentoxidon 50°-on megszárítjuk. Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTBV -Leu-NHNH2-t kapunk. Olvadáspontja 265 , 10 [a]&°=-18° (c=l, 8:2 arányú dimetilformamid-víz elegyben). ABCD részsorozat: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu- W -Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-GLy-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3 AcOH • 3 H2 0 3 g heptapeptidhidrazidot (D részsorozat) 30 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot -20°-ra 20 hűtjük, hozzáadunk 2 ml dioxán-4n sósav elegyet, majd 0,3 ml terc-butilnitritet. 10 percig —20-on keverjük, hozzáadunk 2 ml trietilamint és 3g hexadekapeptidamidot (ABC részsorozat), 16 óra hosszat 0°-on keverjük, és szárazra pároljuk. A 25 maradékot 0°-on híg ecetsavval, majd vízzel mossuk, szűrőn elválasztjuk, a maradékot 9 : 1 arányú metanol-víz elegyben oldjuk, az oldatot kovasavgélen átszűrjük, a szüredéket bepároljuk, a maradékot etilacetáttal mossuk, 200 ml 80%-os ecetsav- 30 ban oldjuk, 4 óra hosszat 25° on állni hagyjuk, 20° -on szárazra pároljuk, a maradékot éterrel, etilacetáttal és ismét éterrel mossuk, szűrőre visszük, és megszárítjuk. Az ABCD részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 240° (bomlik), 35 [«]D --38° (c=l, ecetsavban). D 1 részsorozat: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 40 a) Z-Gln-Leu-OMe 40,1 g Z-Gln-ONP-t és 19,1 g H-Leu-OMe • HCl-t feloldunk 300 ml dimetil- 45 formamidban, az oldathoz hozzáadunk 34,1 ml N-metilmorfolint, és 15 óra hosszat, időnként felrázva 20°-on állni hagyjuk. Ezután az oldatot nagyvákuumban teljesen bepároljuk. A maradékot vízzel jól elkeverjük, majd szűrőn elválasztjuk. 50 Metanolból átkristályosítva Z-Gln—Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 168°, [a&° = -ll° (c=l, dimetilformamidban). b) H-Gln-Gln-Leu-OMe 55 x 27,8 g Z-Gln-Leu-OMe-t feloldunk 130 ml jégecetben és hozzáadunk 220 ml 40%-os jégecetes hidrogénbromid oldatot. Az oldatot 1 óra hosszat, időnként felrázva állni hagyjuk. Ezután vákuumban 60 teljesen bepároljuk, a maradékot száraz éterrel eldörzsöljük, és szűrés után az erősen higroszkopikus H—Gln-Leu—OMe • HBr-t étertől nedves állapotban szárítószekrényben szobahőmérsékleten megszárítjuk. 65 77,5 g Z-Gln-ONP-t és 81,4 g H-Gln-Leu-OMe • HBr-t feloldunk 750 ml dimetilformamidban, és hozzáadunk 66,5 ml N-metilmorfolint. Az oldatot 15 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban teljesen bepároljuk. A maradékot vízzel jól elkeverjük, és a vizet szűréssel eltávolítjuk. A szűrési maradékot acetonnal eldörzsöljük, és présben elválasztjuk az acetonosfázistól. Vákuumban való szárítás után Z-Qn— Qn-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 238°, [a]x3° = -16° dimetilformamidban. 54,8 g Z-Gln-Gln-Leu-OMe-t feloldunk 1200 ml dimetilformamidban. Ezután az oldathoz hozzáadjuk 10 g 10% palládiumot tartalmazó palládiumszénnek 70 ml vízzel készült szuszpenzióját. Szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson való 1 órai hidrogénezés után az elméletileg szükséges teljes hidrogénmennyiség elfogy. A katalizátort szűréssel elválasztjuk, és a szüredéket vákuumban teljesen bepároljuk. A maradékot metanol és éter 1 :4 térfogatarányú elegyéből átkristályosítjuk. H-Gln-Gln-Leu—OMe—t kapunk. Olvadáspontja 151°, MD0 = -10° ' (c= 1, dimetilformamidban). c) Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe Lásd a D c) részsorozatot. d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 Lásd a D d) részsorozatot, e) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2 A D e) részsorozatra leírt eljárás szerint eljárva, de H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe-t azonos mennyiségű H-Gln—Gln-Leu—OMe-vel helyettesítve Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-NHNH2-t kapunk. Olvadáspontja 270°, [a]D°=-12° (c=l, 8:2 arányú dimetilformamid-víz elegyben.) ABCD 1 részsorozat: H-Gly-Lys(BOC)-Leu~ Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3 AcOH -3 H2 0 Az ABCD részsorozatra leírt módon eljárva, de a D részsorozatot azonos mennyiségű D 1 részsorozattal helyettesítve az ABDC 1 részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 245° (bomlik), [a%° =-40° (c=l, ecetsavban). ABC1D részsorozat: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3 AcOH -3^0 Az ABCD részsorozatra leírt módon eljárva, de az ABC részsorozatot azonos mennyiségű ABC 1 részsorozattal helyettesítve az ABC1D részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 230° (bomlik), [a ]2j0 == _4o° (0=1, ecetsavban). 8
