167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
17 167369 18 ABC1D1 részsorozat: H-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3AcOH • 3H20 Az ABCD részsorozat előállítására leírt módon eljárva, de az ABC részsorozatot azonos mennyiségű ABC 1 részsorozattal és a D részsorozatot azonos mennyiségű D 1 részsorozattal helyettesítve az ABC1D1 részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 255°, (bomlik), [afö0=-41°(c = l, ecetsavban). E részsorozat: H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH a) H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe • HBr 21,0 g Z-Cys(Bzl)-OCP-t és 12,3 g H-Val-Leu-OMe • HCl-t feloldunk 120 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 5,9 ml trietilamint, az oldatot 16 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, hozzáadunk etilacetátot, híg sósavval mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, szárazra pároljuk, és a maradékot etilacetát és dietiléter 1 :2 térfogatarányú elegyéből kikristályosítjuk. Z-CYs(Bzl)— Val-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 160°, [a]f)0=-28 o (c=l, dimetilformamidban.) Ezt a vegyületet 210 ml 40%-os jégecetes hidrogénbromid oldatban oldjuk, az oldatot 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, szárazra pároljuk, és a maradékot izopropanol és dietiléter 1 :2 térfogatarányú elegyéből kikristályosítjuk. H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe • HBr-et kapunk. Olvadáspontja 168°, MD° = +14° (c=l, dimetilformamidban.) b) H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe- 1,3 HBr 20 g Z-Thr-NHNH2 -t 350 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot — 20°-ra hűtjük, hozzáadunk 100 ml 2 n dioxános hidrogénkloridot, majd még 10 ml terc-butilnitritet. -20°-on való 10 perces állás után hozzáadunk 45 ml trietilamint és 25,5 g H-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe • HBr-t, és a kapott keveréket 16 óra hosszat 0°-on rázzuk. Ezután szárazra pároljuk, a maradékot etilacetát és víz 3:1 térfogatarányú keverékében oldjuk, a szerves fázist rüg sósavval mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, bepároljuk és a maradékot etilacetátból kikristályosítjuk. Z-Thr-Cys(Bzl)Val-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 208° [a]o° =-27° (c=l, dimetilformamidban). Az így kapott tetrapeptidből 20g-ot feloldunk trifluorecetsav és etilacetát 200 ml 1:1 arányú elegyében, 1 óra hosszat 0°-on gáznemű hidrogénbromidot vezetünk az oldatba, ezután bepároljuk, és a maradékot metanol és dietiléter elegyéből ki kristályosítjuk. H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe • 1,3 HBr-t kapunk. «Olvadáspontja 202°, [a]D°= -10° (c = 1, dimetilformamidban). c) H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH 372 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu OMe« 1,3 HBr-t feloldunk 1800 ml metanolban, 900 ml 2n nátriumhidroxid oldatot adunk hozzá, 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, hozzáadunk 240 ml jégecetet, és 2 óra hosszat 0 -on állni hagyjuk. A kivált kristályos tömeget szűrőre visszük, n ecetsavval, majd vízzel mossuk, és 50°-on nagyvákuumban megszárítjuk. H-Thr-5 Cys(Bzl)-Val-Leu-OH-t kapunk. Olvadáspontja 219°, [a]D°>=-53° (c= 1, n ammóniaoldatban). F részsorozat: BOC—Cys(Bzl)-Ser-Asn— 10 -Leu-Ser-NHNH2 a) H-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl 43 g H-Leu-Ser-OMe • HCl-t és 53 g 15 BOC-Asn-ONP-t 400 ml dimetilformamidban oldunk, hozzáadunk 22 ml trietilamint, 16 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk; majd szárazra pároljuk, és a maradékot metanolból átkristályosítjukl BOC-Asn-Leu-Ser-OMe-t kapunk. Olvadás-20 pontja 190°, [a]D ° = -24° dimetilformamidban. Ezt a terméket 500 ml 4n metanolos sósavban oldjuk, az oldatot 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, szárazra pároljuk, a maradékot metanolban oldjuk, és dietiléterrel kicsapjuk. 25 H-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl-t kapunk. Olvadáspontja 180°, [a]l° =-23° (c=l, dimetilformamidban). b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl 30 39,5 g BOC-Ser-NHNH2 -t feloldunk 500 ml dimetilformamidban, az oldatot -20°-ra hűtjük, hozzáadunk 200 ml 2n dioxános hidrogénklorid oldatot, majd 20 ml terc-butilnitritet. 10 perc 35 múlva -20°-on hozzáadunk 90 ml trietilamint és 38,0 g H-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl-t, majd 16 óra hosszat 0°-on keverjük, szárazra pároljuk, és a maradékot kloroform és dietiléter 1 :6 térfogatarányú elegyéből átkristályosítjuk. BOC—Ser—Asn— 40 Leu—Ser-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 135°, [«ID0 = -22° dimetilformamidban. Ezt a terméket 420 ml 4 n metanolos hidrogénklorid oldatban oldjuk, az oldatot 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, majd szárazra pároljuk, és a maradékot 45 metanol és etilacetát 1:3 térfogatarányú elegyéből kikristályosítjuk. H-Ser—Asn-Leu-Ser-OMe • HCl-t kapunk. Olvadáspontja 155° (bomlik),[a] D°=—15° (c=l, dimetilformamidban.) 50 c)BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 18,5g H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl-t és 18 g BOC-Cys(Bzl)-ONP-t feloldunk 100 ml di-55 metilformamidban, az oldathoz 10 ml vizet, 3,5 ml ecetsavat és 5,6 ml trietilamint adunk, 16 óra hosszat 25°<m állni hagyjuk, szárazra pároljuk, és metanolból kikristályosítjuk. BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn—Leu-Ser—OMe—t kapunk. Olvadáspontja 60 182°, [a]D °=-17° dimetilformamidban. Ezt a terméket enyhe melegítés közben 200 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldathoz 200 ml metanolt és 20 ml hidrazinhidrátot adunk, 16 óra hosszat 30°-on állni hagyjuk, dietilétert adunk hozzá, a 65 kivált csapadékot 1 :1 arányú dietiléter-metanol 9
