167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
iS 167369 14 ABC 1 részsorozat: H-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3CH3COOH Az ABC részsorozat előállítására leírttal analóg eljárás szerint 10 g heptapeptidből (C 1 részsorozat) és 10 g nonapeptidből (AB részsorozat), az ABC 1 részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 166° (bomlik), [aß? = -50° (c=l, n ecetsavban). D részsorozat: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln~Glu(OTB)-Leu-NHNH2 a) Z-Glu(OTB)-Leu-OMe 151 g Z-Glu(OTB)-OH-t és 54 g N-hidroxiszukcinimidet feloldunk 700 ml acetonitrilben, és az oldatot -20°-ra hűtjük. Ezután hozzáadunk 96,5 g diciklohexilkarbodiimidet 350 ml acetonitrilben oldva. 30 percig állni hagyjuk, majd a keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk. A szüredékhez 71,2 g H-Leu-OMe-t adunk 4 óra hosszat állni hagyjuk, és vákuumban bepároljuk. A szilárd maradékhoz 2:1 arányú etilacetát-víz elegyet adunk. A szerves fázist 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, vízzel és 3 pH-in híg kénsawal mossuk, semlegesre mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, és bepároljuk. A maradékot 1% metanolt tartalmazó kloroformban oldjuk, és 10-szeres mennyiségű kovasavgélt tartalmazó oszlopon átszűrjük. Z-Glu(OTB)Leu—OMe—t kapunk. Olvadáspontja 31°. [a]í>° =-12° (c=l, dimetilformamidban). b) H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe 118g Z-Glu(OTB)-Leu-OMe-t feloldunk 2000 ml metanolban, hozzáadjuk 15 g 10% palládiumot tartalmazó palládiumszénnek 63 ml 4 n sósavval készült szuszpenzióját, és szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson 2 óra hosszat hidrogénezzük. Eközben az elméletileg szükséges hidrogénnek kb. 85%-a fogy. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a szüredéket teljesen bepároljuk. H-Glu(OTB)-Leu-OMe • HCl-t kapunk amorf hab alakjában. 91,7 g Z-Gln-ONP-t és 93,8 g H-Glu(OTB)-Leu-OMe • HCl-t feloldunk 500 ml dimetilformamidban, és hozzáadunk 51 ml N-metilmorfolint. Az oldatot 15 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban teljesen bepároljuk. Az így kapott maradékot vízzel alaposan elkeverjük, majd a vizet szűréssel eltávolítjuk. A maradékot metanolból átkristályosítva Z-Gln-Gíu(OTB)Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 210° (bomlik): [ajo0 . = -40° (c=l, dimetilformamidban). 44,4 g Z-Gln-Glu(OTB)-Léü-OMe-t feloldunk 1200 ml metanol és dimetilformamid 1 :1 arányú elegyében. Ezután hozzáadunk 15 g 10% palládiumot tartalmazó palládiumszenet 50 ml vízben szuszpendálva. 2 órai hidrogénezés után csaknem a teljes elméleti hidrogénmennyiség elfogy. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a szüredéket vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és telített nátriumklorid oldattal háromszor mossuk. A szerves fázist nátriumszulfáton megszárítjuk, és a szüredéket eredeti térfogatának kb. 1/3-ára bepároljuk. Petroléter hozzáadása után a 5 tripeptid szűréssel elválasztható. H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 123*, [a]h° = -14° (c=l, dimetilformamidban.) c) Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe 10 43 g H-Leu-Ser-OMe • HCl-t és 80 g Z-Lys(BOC)-OCP-t feloldunk 400 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 22 ml trietilamint, 25°-on 25 óra hosszat állni hagyjuk, a kivált 15 trietilamint szűréssel eltávolítjuk, és a szüredéket szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, híg sósavval, majd káliumhidrogénkarbonát oldattal mossuk az oldatot, nátríumszulfáton megszárítjuk, leszűrjük, és bepároljuk. A maradékot 20 etüacetát és éter 1 :4 térfogatarányú elegyéből átkristályosítva Z-Lys(BOC)-Leu-Ser-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 110°, [a]rj0 =-14° (c=l, dimetilformamidban). 25 d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 158g Trt-Gly-OH-t feloldunk 2000 ml diklórmetán és 72 ml trietilamin elegyében, -5°-ra hűtjük, hozzáadunk 50 ml klórhangyasav-etilésztert, 30 és 10 percig -5°on keverjük. Ugyanakkor 300 g Z-Lys(BOC)-Leu-Set-OMe-t feloldunk 3000 ml 8:2 arányú diöxán-víz elegyben, palládiumszén jelenlétében szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson hidrogénezzük, leszűrjük, és a szüre-35 déket bepároljuk. A maradékot kloroformban oldjuk, és hozzáadjuk a fentiek szerint előállított vegyes anhidridet. Egy óra hosszat 0°-on állni hagyjuk, a kloroformos oldatot híg ecetsavval, majd híg káliumhidrogénkarbonát oldattal mossuk, 40 megszárítjuk, és szárazra bepároljuk. A maradékot 1250 ml metanolban oldjuk, hozzáadunk 175 ml hidrazinhidrátot, és 16 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk. 500 ml-re koncentráljuk, vizet adunk hozzá, szűrőre visszük, a maradékot vízzel mossuk, 45 és foszforpentoxidon megszárítjuk. Trt—Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja 204°, [a]!,0 = -6° (c=l, dimetilformamidban). 50 e) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-GLu(OTB)-Leu-NHNH2 76 g Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-NHNH2 -t feloldunk 300 ml dimetilformamidban, az oldatot 55 -20°-ra hűtjük, hozzáadunk 75 ml dioxán-4n sósav elegyet, majd 11,6 ml terc-butilnitritet, 10 percig -15°-on keverjük, hozzáadunk 70 ml trietilamint és 49,5 g H-Gln-Glu(OTB)-Leu-OMe-t. Ezután 0°-on 16 óra hosszat keverjük, a kivált 60 trietilamin-hidrokloridot szűréssel elválasztjuk, a szüredéket 100 ml-re koncentráljuk, és vizet adunk hozzá. A csapadékot szűréssel elválasztjuk, vízzel mossuk, és nagyvákuumban 50°-on megszárítjuk. A maradékot etilacetáttal kifőzzük, éterrel mossuk, és 65 megszárítjuk. Az így kapott Trt-Gly-Lys(BOC)-7
