167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
5 167369 6 Ennek a találmánynak a tárgya egy harmadik kalcitonin — a lazackalcitonin és annak analógjai savaddíciós sóinak — totálszintézise. A leírásban a következő rövidítéseket használjuk: 5 10 15 termék o z Karbobenzoxi (benziloxikarbonil) Bzl Benzil BOC terc-butiloxikarbonil Trt tritil=trifenilmetil OTB terc-butiloxi ONP p-nitrofenilészter OCP 2,4,5-triklórfenoxi OMe metoxi OEt etoxi N02 nitro Ser L-szeril Asp L-aszparagil Asn L-aszparaginil Ala L-alanil Leu L-leucil Thr L-treonil Val L-valil Tyr L-tirozil Arg L-arginil Gin L-glutaminil Glu L-glutamil His L-hisztidil Orn L-ornitil Pro L-prolil Gly glicil Lys Uizil Cys L-ciszteinil Piv pivaloil MCP jj-merkaptopropionil OSu N-oxiszukcinimid EOC etoxikarbonil DCHA diciklohexilamin 20 25 30 dékot, és az oldatot lehűtjük. A Z-Thr-Pro-NHj. Olvadáspontja 148 [a ]2 ) o=_72° (c=l, 95%K)s ecetsavban). 90 g 2-Thr-Pro-NH2 -t 2 liter dioxánban és 260 ml n sósavban oldunk, és 20°-on atmoszférikus nyomáson palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Szűrés és bepárlás után a kristályos maradékot etilacetáttal mossuk. H-Thr-Pro-NH2 'HCl-t kapunk. Olvadáspontja 216°, [a]|) 0 =-64 o (c=l ) 95%-os ecetsavban). b) Z-Ser-Gly-NHNH2 14,5 g Z-Ser-OH-t feloldunk 100 ml kloroformban, és hozzáadunk 6,1 g N-metilmorfolint, majd hozzácsepegtetünk 8,2 g klórhangyasav-izobutilésztert. Tíz perc múlva hozzáadjuk 6,6 g glicin-etilészternek 60 ml kloroformmal készült oldatát, és szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. A reakciókeveréket híg vizes ammóniával, majd sósavval mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, és a szerves fázist bepároljuk. A maradék Z—Ser-Gly—OEt-et etilacetátból kikristályosítjuk. Olvadáspontja 103°, [a]l° =+3° (c=l, dimetilformamidban). 19,4 g Z-Ser-Gly-OEt-et feloldunk 270 ml etilalkoholban, hozzáadunk 27 ml hidrazinhidrátot, és 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kristályos tömeget szűrőre visszük, metanollal mossuk, és megszárítjuk. Z-Ser-Gly-NHNH2 -t kapunk 180° olvadásponttal, [a]D°=+2° (c=l, dimetilformamidban). 35 c) H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 A következő példák a találmány szerinti eljárás 40 végrehajtását szemléltetik, annak terjedelmét azonban nem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokokban közöljük. A következő példákban közölt aminosavelemzésekből kitűnik, hogy az egyes aminosavak a várt arányban vannak jelen. 45 A részsorozat: H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 a)H-Thr-Pro-NH2 -HCL 50 134g Z-Thr-NH-NH2 -t -5°-on feloldunk 2 liter n sósavban, és az oldathoz hozzáadunk 0,55 liter n nátriumnitrit oldatot, öt perc múlva káliumkarbonát hozzáadásával 9 pH-ra állítjuk be, a keletkezett azidot etilacetáttal extraháljuk, és hoz- 55 záadjuk 80 g H-Pro-NH2 -hidrokloridnak 100 ml vízzel, 500 ml dimetilformamiddal és 77 ml trietilaminnal készült oldatát. Az etilacetátot vákuumban 20°-on eltávolítjuk, és a maradékot éjjelen át 25°-on állni hagyjuk. Ezután a maradék folyadékot 60 vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot vízzel, híg sósavval és vizes káliumkarbonát oldattal mossuk, és nátriumszulfáton megszárítjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, meleg etilacetátban oldjuk a mára- 65 200 ml dimetilformamidhoz hozzáadunk 25 ml 4n etiléteres hidrogénklorid oldatot és abban feloldva 11 g Z-Ser-Gly-NHNH2 -t. Ezután -10°-on hozzácsepegtetünk 5,4 ml terc -butilnitritet, majd hozzáadunk 18 ml trietilamint, és leszűrjük. Egyidejűleg feloldunk 12 g H-Thr-Pro-NH2 «HQ-t 100 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 6,2 ml trietilamint, leszűrjük a kivált trietilamin-hidrokloridról, és a szüredékhez hozzáadjuk a fent kapott dipeptidazid oldatot. Az oldatot 2 óra hosszat 0°-on állni hagyjuk, szárazra bepároljuk, a maradékot 500 ml metanol és 100 ml víz elegyében oldjuk, és az oldatot átbocsátjuk 100 ml Dowex-50 hidrogénfázisban lévő oszlopán. Az oldatot ezután bepároljuk, és a maradékot metanol és etilacetát 1 :3 térfogatarányú elegyéből átkristályosítva Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 132° (bomlik), [a]l° =-22° (c=l, dimetilformamidban). 22 g Z-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -t feloldunk 440 ml metanol és 88 ml víz elegyében, és 20°-on atmoszférikus nyomáson palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Ezután az oldatot leszűrjük, szárazra bepároljuk, a maradékot éterrel mossuk, és megszárítjuk. H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 95 (bomlik), [a]£>° =-27° (c=l, dimetilformamidban.) 3
