167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
29 167369 30 b) Z-Gln-Asp-OTB)-Leu-OMe 118g Z-Asp(OTB)-Leu-OMe-t feloldunk 2000 ml metanolban. Az oldathoz hozzáadjuk 15 g 10%-os palládiumszén 63 ml n sósavval készült szuszpenzióját. A keveréket szobahőmérsékleten atmoszférikus nyomáson 2 óra hosszat hidrogénezzük. Ezalatt az elméleti mennyiségű hidrogén mintegy 85%-a fogy el. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk, mire H-Asp(OTB)-Leu-OMe • HCl marad vissza amorf hab alakjában. 91,7 g Z-Gln-ONP és 93,8 g H-Asp(OTB)Leu—OMe • HCl 500 ml dimetilformamiddal készült oldatához hozzáadunk 51 ml N-metilmorfolint. A keveréket szobahőmérsékleten 15 óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldatot vákuumban teljesen bepároljuk. A kapott maradékot vízzel digeráljuk, és szűréssel elválasztjuk. A terméket metanolból átkristályosítva bomlás közben 189°-on olvadó Z-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t kapunk. [Ű]D° =-30 (c=l, dimetilformamidban). c) Z-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe 44,4 g Z-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t feloldunk 1200 ml metanol-dimetilformamid elegyben. Ezután az oldathoz hozzáadjuk 15 g 10%-os palládiumszén 50 ml vízzel készült szuszpenzióját. Mintegy 2 órai hidrogénezés után a számított mennyiségű hidrogén csaknem teljesen elfogy. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket vákuumban bepároljuk. 21,4 g Z-Ser-NHNHa-t feloldunk 100 ml dimetilformamidban, az oldatot -20°-ra hűtjük, és hozzáadunk 50,6 ml 5 n éteres hidrogénklorid-oldatot és 10,3 ml terc-butilnitritet. 10 perc keverés után az oldat pH-ját 35,6 ml trietilaminnal beállítjuk 7,5 értékre, és hozzáadunk 34,2 g H-Gln-Asp(OTB)-Leu)OMe-t 100 ml dimetilformamidban oldva. A keveréket 4 óra hosszat 20°-on keverjük, a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A maradékot vízzel kezeljük, majd vizes metanolból való átkristályosítás után a nyers terméket kloroform-metanol eleggyel kovasavgéloszlopon átszűrve tisztítjuk. így 172° olvadáspontú Z-Ser-Cin-Asp(OTB)-Leu-OMe-t kapunk, [aß0 = -24° (c=l, dimetilformamidban). d) Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 . 50,8 g Z-Lys(BOC)-Leu-OMe-t feloldunk 600 ml etilacetátban, és 25 ml 4 n éteres hidrogénklorid-oldat és 3 g 10%-os palládiumszén hozzáadása után katalitikusan hidrogénezzük. Mintegy 4 óra múlva a számított mennyiségű hidrogén csaknem teljesen elfogyott. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéke fele térfogatára bepároljuk. 33,0 g Trt-Gly-OH és 12,0 g N-hidroxiszukcinimid 150 ml dimetilformamiddal készült oldatát —15°-ra hűtjük, és hozzáadjuk 21,6 g diciklohexilkarbociimidnek 100 ml acetonitrillel készült oldatát, majd a reakciókeveréket időnként felrázva szobahőmérsékleten 3 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután a kikristályosodott diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szüredékhez hozzáadunk 25 ml N-metil-morfolint és a fenti, hidrogénezett dipeptidoldatot. A keveréket 16 óra hosszat állni 5 hagyjuk, majd teljesen bepároljuk. A maradékhoz etilacetátot adunk, és 0°-on n kénsawal és 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kezeljük. Nátriumszulfáton való szárítás után a szerves fázist teljesen bepároljuk. A kapott habot kloroform-me-10 tanol elegy segítségével átszűrjük egy kovasavgéloszlopon, és így bepárlás után Trt—Gly— Lys(BOC)-Leu-OMe—t kapunk amorf hab alakjában. [ajp0 =-10° (c=l, metanolban). A maradékot 300 ml metanolban oldjuk, hoz-15 záadunk 17 ml hidrazinhidrátot, és 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Teljes bepárlás és nagyvákuumban való teljes kiszárítás után a terméket kloroform-metanol elegyben kovasavgéloszlopon szűrjük. Kloroform-petroléter elegyből 20 való kristályosítás után 175°-on olvadó Trt—Gly— Lys(BOC)-Leu-NHNH2-t kapunk. [aß 0 =-12° (c= 1, metanolban). e) Trt-Gly-Ly<BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-25 -Leu-NHNH2 26,6 g Z-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t feloldunk 1 liter metanol-dimetilformamid elegyben, az oldathoz hozzáadunk 5g 100 ml vízben szusz-30 pendált 10%-os palládiumszenet, és katalitikusan hidrogénezzük. Egy óra alatt a számított hidrogénmennyiség elfogy. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket a metanol eltávolítására koncentráljuk. 29,6 g Trt-Gly-Ly<BOC)-Leu-NHNH2 -t 35 150 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot —20°-ra hűtjük, és hozzáadunk 26,2 ml 5 n éteres hidrogénklorid-oldatot, és 5,3 ml terc-butilnitritet. 10 perc keverés után hozzáadunk 18,5 ml trietilamint, és a fent kapott bepárolt H-Ser—Gin— 40 Asp-(OTB)-Leu-OMe oldatot. A keveréket szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük, a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A maradékhoz étert adunk, és a porszerű terméket leszivatással elválasztjuk. Ezt a 45 nyers terméket kovasavgéloszlopon kloroform-metanol eleggyel átszűrjük. így 217° olvadáspontú Trt-Gly-Ly s(BOC) -Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-OMe-t kapunk. [Ű]D0= -30° (c=l, metanolban). 50 A heptapeptidet 400 ml metanolban oldjuk, hozzáadunk 1,4 ml hidrazinhidrátot és szobahőmérsékleten 48 óra hosszat keverjük. A kivált hidrazidot kiszűrjük, éterrel mossuk, és súlyállandóságig szárítjuk. Olvadáspontja 218°. [a]D°=-16° (c=l, 55 dimetilformamidban). ABC2 részsorozat: Z— His— Lys(BOC)-Leu— -Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-THr-Pro-NH2 60 1,5 8 g Z-His-Lys(BOC)-leu-Gln-Thr-Fhe-Pro-NHNH2 (C 2 részsorozat) 60 ml dimetilformamiddal készült — 18°-ra előhűtött oldatához hozzáadunk 5,4 ml 5,65 n dioxános hidrogénklo-65 rid-oldatot és 0,8 ml butilnitritet. A hőmérsékletet 15
