167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
27 167369 28 gyéből való átkristályosítás után líO°-on olvadó Z-Gln-Thr-(OTB)-Phe-Pro-OMe-t kapunk. [a]%° =-41° (c= 1, metanolban). A tetrapeptidet 250 ml trifluorecetsavban oldjuk, szobahőmérsékleten való 20 perc állás után az 5 oldatot fele térfogatára bepároljuk, és a terméket éterrel kicsapjuk. Szűrés és éterrel való kellő mosás után megszárítva 154°-on olvadó Z-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t kapunk. [aß 0 = -59° (c=l, metanolban). 10 b) Z~His-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 114 g Z-Lys(BOC)-OH-t, 48 g H-Leu-OMe-t és 69 g N-hidroxiszukcinimidet 600 ml etilacetátban 15 oldunk, és az oldatot -20°-ra hűtjük. Az oldathoz hozzáöntjük 65 g diciklohexilkarbodiimidnek 300 ml etilacetáttal készült oldatát. A keveréket időnként felrázva szobahőmérsékleten 16 óra hosszat állni hagyjuk. A kikristályosodott diciklo- 20 hexilkarbamidot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A szilárd maradékhoz vizet adunk és szűréssel elválasztjuk. Etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítva 113°-on olvadó Z-Lys(BOC)-Leu-OMe-t kapunk, [aß 0 = -18° 25 (c= 1, metanolban). 101,5 g Z-Lys(BOC)-Leu-OMe-t feloldunk 1000 ml etilacetátban, és az oldathoz hozzáadjuk 40 ml 5 n éteres hidrogénklorid-oldat és 300 ml etilacetát elegyét. 5g 10%-os palládiumszén 50 ml 30 dimetilformamiddal készült szuszpenziójának hozzáadása után 3,5 óra hosszat hidrogénezünk. Eközben a számított hidrogén mennyiség csaknem teljesen elfogy. Ezután a katalizátort kiszűrjük, és a szűredéket bepároljuk. 35 78,7 g Z-His-NHNH2 -t feloldunk 400 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 182 ml 5n éteres hidrogénklorid-oldatot, és az oldatot -10°-ra hűtjük. 32,5 ml terc-butilnitrit hozzáadása után még 40 10 percig keverjük, és 140 ml trietilaminnal közömbösítjük. A fent kapott H-Lys(BOC)-Leu-OMe • HCl-t 300 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz 36,4 ml trietilamint adunk, és hozzáöblítjük az 45 azidoldathoz. Szobahőmérsékleten való 4 órai keverés után a kikristályosodott trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A kapott olajat etilacetátban oldjuk, az oldatot vízzel mossuk, a szerves fázist nátrium- 50 szulfáton szárítjuk, szűrjük, és bepároljuk. Ezután petroléterrel kicsapjuk, és szűrőn elválasztjuk. A nyers terméket kovasavgélen kromatografálva és kloroform-metanol eleggyel eluálva tisztítjuk. Éter és petroléter elegyéből átkristályosítva 55 Z-His-Lys(BOCV-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 146°, [aß 0 = -28° (c=l, metanolban). 64,5 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-OMe-t 300 ml metanolban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 60 15 ml hidrazinhidrátot. Szobahőmérsékleten való 3 napi állás után az oldatot teljesen bepároljuk. A maradékhoz hozzáadjuk etilacetát és n-butanol elegyét, és telített nátriumklorid-oldattal többször mossuk. A szerves fázist bepároljuk, és a száraz 65 maradékot kloroform-metanol eleggyel készült oldatban kovasavgéloszlopon átszűrjük. így Z-His-Lys-(BOC)-Leu-NHNH2-t kapunk. Olvadáspontja 181°, [aß0 =-26° (c= 1, metanolban). c) Z-His-Lys(BOC-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-NHNH2 38,4 g Z-GIn-Thr-Phe-Pro-OMe-t feloldunk 1500 ml metanol-dimetilformamid elegyben. Hozzáöblítünk 10 g 10%-os palládiumszenet 50 ml vízzel. Fél óra múlva a számított mennyiségű hidrogén gyakorlatilag elfogy. A katalizátort szűréssel elválasztjuk, és a szüredéket bepároljuk. 38,6 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 -t 250 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot -15& -ra hűtjük, és hozzáadunk 42 ml 5 n éteres hidrogénklorid-oldatot, és 7,3 ml terc-butilnitritet. A keveréket 10 percig keverjük, majd 29,5 ml trietilaminnal közömbösítjük. A fent közölt módon előállított H-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t 250 ml dimetilformamidban oldjuk, és hozzáadjuk a peptidazid-oldathoz. Szobahőmérsékleten való 4 órai keverés után a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A maradékhoz hozzáadjuk etilacetát és n-butanol elegyét, és n vizes ammóniaoldattal, n kénsawal és több ízben vízzel mossuk. A szerves fázist teljesen bepároljuk, és a maradékot kovasavgéloszlopon kloroform-metanol -víz keverékkel eluálva tisztítjuk, így 171° olvadáspontú Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t kapunk, [aß 0 = -54°, (c=l, metanolban). 43,6 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Ome-t feloldunk 1000 ml metanol-dimetilformamid elegyben, és az oldathoz hozzáadunk 44 ml hidrazinhidrátot. Szobahőmérsékleten való 4 napi állás után az oldatot teljesen bepároljuk. A maradékhoz aceto* nitrilt adunk, a keveréket felforraljuk, és lehűlés után körülbelül 20°-on szűrjük. így 175°-on olvadó Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-NHNH2-t kapunk. [aj?,0 =-58° (c=l, metanolban). D2 részsorozat: Trt-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Asp(OTB)-Leu-NHNH2 a) Z-Asp(OTB)-Leu-OMe 151 g Z-Asp-(OTB)-OH-t, és 54 g N-hidroxiszukcinimidet feloldunk 700 ml acetonitrilben, és az oldatot — 20°-ra hűtjük. Ezután hozzáadjuk, 96,5 g diciklohexilkarbodiimid 350 ml acetonitrillel készült oldatát. 30 perces állás után a keletkezett diciklohexilkarbamidot kiszűrjük. A szüredékhez hozzáadunk 71,2 g H—Leu-OMe—t, majd 4 óra hosszat állni hagyjuk, és vákuumban bepároljuk. A szilárd maradékhoz etilacetátot és vizet adunk. A szerves fázist 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, vízzel és 3 pH-s híg kénsawal mossuk, semlegesremosás után nátriumszulfáton szárítjuk, és bepároljuk. A maradékot 1% metanolt tartalmazó kloroformban oldjuk, és 10-szeres mennyiségű kovasavgélt tartalmazó oszlopon átszűrjük, így 58° olvadáspontú Z-Asp(OTB)Leu-OMe-t kapunk, [aß 0 =-16° (c=l, dimetilformamidban). 14
