167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
25 167369 26 13. példa BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Gln-Leu-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -—diacetát—trihidrát Kiindulási termék: EF és ABGD1 részsorozatok. Az 1. példa szerinto eljárás. Olvadáspontja 235° (bomlik), [a]l° = -43° (c=l, 2 :1 arányú n ecetsav és metanol elegyben). Kitermelés 70%. 14. példa H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly—Lys-Leu-Ser—Gin—Gin—Leu—His—Lys-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -hexaacetát-dekahidrát Kiindulási termék: dotriakontapeptid (13. példa) A 2. példa szerinti eljárás. Olvadáspontja 216° (bomlik), [a]fe°=-43° (c = 1, ecetsavban). Kitermelés 90%. 15. példa H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Asp-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • AcOH • 3H 2 0. AB részsorozat: H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 2 AcOH 13,5 g BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 -t (B részsorozat) feloldunk 270 ml 8:2 arányú dimetilformamid-víz elegyben, az oldatot -15°-ra hűtjük, és hozzáadunk 40 ml 4 n dioxános hidrogénklorid-oldatot és 2,5 ml terc-butilnitritet. A keveréket 10 percig —15°-on keverjük, hozzáadunk 28 ml trietilamint, leszűrjük, hozzáadunk 10,5 g H-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -t (A részsorozat), 16 óra hosszat 0°-on keverjük, majd bepároljuk, a száraz maradékot éterrel mossuk, és szárítjuk. A maradékot metanolban oldjuk, 1/10 térfogat vizet és hétszeres mennyiségű kloroformot adunk hozzá, és a kapott oldatot átbocsátjuk 500 g kovasavgélt tartalmazó oszlopon. Növekvő mennyiségű metanollal eluálva bepárlás után BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -t kapunk. Ezt a vegyületet 200 ml 4 n dioxános hidrogénklorid-oldatban szuszpendáljuk, és 2 óra hosszat 25°-on keverjük. Ezután bepároljuk, a száraz maradékot 0,2 n ecetsavoldatban oldjuk, acetátfázisban levő Amberlit IRA 410 gyantával kezeljük, és a vizes oldatot liofilizáljuk. Ezután a maradékot éterrel, etilacetáttal és ismét éterrel mossuk, és nátriumhidroxid-forgácson szárítjuk. így 195°on bomlás közben olvadó H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly- Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 2AcOH-t kapunk. [a&° = = -64° (c = 1,1:1 arányú n sósav és dimetilformamid 5 elegyben). C2 részsorozat: Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-10 -Pro-NHNH2 a) Z-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe 84,8 g Z-Thr(OTB)-OMe-t 1500 ml metanolban 15 oldunk, és az oldathoz 125 ml 2n sósavat, és 10 g 10%-os palládiumszenet adunk. Négy órai hidrogénezés után a katalizátort kiszűrjük, és az oldatot teljesen bepároljuk. 61.2 g Z-Gln-OH-t és 25,6 g N-hidroxiszuk-20 cinimidet feloldunk 1000 ml acetonitril-dimetilformamid elegyben, és az oldatot -15°-ra hűtjük. Hozzáadjuk 45,7 g diciklohexilkarbodiimid 200 ml acetonitrillel készült oldatát, és a fent kapott H-Thr(OTB)-OMe • HCl-t dimetilformamidban 25 oldva, továbbá 30,4 ml trietilamint. A keveréket időnként felrázva mintegy 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kikristályosodott trietilamin-hidrokloridot, illetve diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepárol-30 juk. A maradékhoz etilacetátot adunk, és n sósavval és 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk. Nátriumszulfáton való szárítás után a szerves fázist mintegy 200 ml térfogatra bepároljuk, és petrolétert adunk hozzá. A kivált 35 olajat állni hagyjuk, és porráalakulás után szűréssel elválasztjuk. így 106°-on olvadó Z-Gln-Thr(OTB)-OMe-t kapunk. [a]l° = +11° (c=l, dimetilformamidban). 78,0 g Z-Gln-Thr-(OTB)-OMe-t 800 ml me-40 tanolban oldunk, és hozzáadunk 65 ml hidrazinhidrátot. Szobahőmérsékleten 48 órán át való állás után az oldatot teljesen bepároljuk. A maradékhoz vizet adunk, majd metanol és víz elegyéből átkristályosítjuk. így 202°-on olvadó Z-Gln-Thr-45 (OTB)-NHNH2 -t kapunk, [aß 0 =-13° (c=l, metanolban). 45.3 g Z-Phe-Pro-OMe-t 750 ml metanolban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 55 ml 2 n sósavat és 12 g 10%-os palládiumszenet. Két órai 50 hidrogénezés után a számított hidrogénmennyiség csaknem teljésen elfogy. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. 49,5 g Z-Gln-Thr-(OTB)-NHNH2 -t 500 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldatot — 20°-ra 55 hűtjük. 77 ml 5 n éteres hidrogénklorid-oldat és 13,4 ml terc-butilnitrit hozzáadása után még 10 percig keverjük, majd 54 ml trietilaminnal közömbösítjük. A fent kapott H-Phe-Pro-OMe • HCl-t 150 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 60 15,4 ml trietilamint, és hozzáadjuk a dipeptidazidhoz. Szobahőmérsékleten való 4 óra keverés után a kikristályosodott trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A maradékot kloroform-metanol elegye segítségével átszűrjük egy 65 kovasavgél-oszlopon. Etilacetát és petroléter ele-13
