167362. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxokobalamin- sók előállítására és/vagy tisztítására
5 167362 6 1. példa: Hidroxokobalamin-acetát a) Ioncserélő oszlopok készítése és aktiválása: a/l. DEAEoszlop: 100 g dietilamino-etil-cellulóz port 600 ml 0,5 n nátriumhidroxid oldatban szuszpendálunk, 10 percig keverjük, majd a pépet üvegszűrőre töltjük és 1,5—2,0 liter desztillált vízzel semlegesre mossuk. a/2. CMC-oszlop: 100 g karboximetil-cellulóz port 600 ml 0,5 n sósav oldatban szuszpendálunk, 10 percig keverjük, majd a pépet üvegszűrőre töltjük és 1,5-2,0 liter desztillált vízzel kloridion-mentesre mossuk. Az így előkészített CMC-gyantát a rajz szerinti készülék felső nyílásán (1) keresztül az oszlopra (2) töltjük és az alsó elvezető csonkon (3) keresztül vákuummal megszivatva a gyantát tömörítjük. A gyantát pontosan az alsó oldalelvezető csonkig (4) töltjük fel, majd szűrőpapír koronggal (5) lefedjük. Az oszlop felső holtterét (6) az elució szempontjából inert anyaggal, üveggyönggyel vagy Raschig-gyűrűvel töltjük ki. b) Eluálószer készítése: 150 ml ionszegény vízből, 100 ml 96-100%-os ecetsavból és 50 ml 1,4-dioxánból oldószerelegyet készítünk. c) Hidroxokobalamin bázis felszabadítása: 10 g hidroxokobalamin-hidroklorid kristályt, melynek hatóanyagtartalma B12a -bázisban kifejezve 7,48 g, 100 ml desztillált vízben oldunk, majd az oldatot az l/a pont szerint előkészített DEAE-oszlopra visszük. Ezután az oszlopot ionszegény vízzel addig eluáljuk, amíg a lecsepegő oldat teljesen színtelenné válik. Az ily módon összegyűjtött oldat térfogata körülbelül 500 ml. Ez az oldat a hidroxokobalamint bázis formájában tartalmazza. d) Hidroxokobalamin bázis megkötése CMC-gyantán és eluciója: A c) pont szerint nyert oldatot az a/2, pont szerint előkészített CMC-oszlopra visszük az oszlop felső nyílásán (1) keresztül. Az elfolyó oldatot, mely a hidroxokobalamin semleges karakterű szennyezéseit tartalmazza, az alsó elvezető csonkon 10 15 20 25 első körülbelül 20 ml színtelen eluátumot elöntjük, a további eluátumokat addig fogjuk fel, amíg a lejövő eluátum színtelenné válik. Az így kapott eluátum térfogata körülbelül 200 ml. e) Kristályosítás és a termék kinyerése: Az 1/d. pont szerint kapott eluátumot kisebb részletekben 10-szeres térfogatú acetonnal hígítjuk, majd az oldatot 24 óráig szobahőmérsékleten állni hagyva kristályosítjuk. A kivált kristályokat szűrjük, kevés acetonnal mossuk, majd szárítjuk. 7,9 g hidroxokobalamin-acetátot kapunk, amelynek hatóanyagtartalma B12a -bázisban kifejezve 7,12 g, a kitermelés az elméletinek 95,2%-a. * összetétel %-ban 'Ctt >> 0 9 § 00 £ C4 ciar sze CA a ~w' »J > r» c* ^ •ö - S5 0Q oa .« .ÖS .14 a kapott termék a kiindulási anyag 30 2. példa: - 83,8 0,0 0,4 15,8 77,0 - 5,2 2,6 15,3 Hidroxokobalamin-propionát Az 1. példában leírtak alapján járunk el, azzal 35 az eltéréssel, hogy az 1/b. pontban leírt eluálószer helyett 150 ml víz, 100 ml propionsav és 50 ml 1,4-dioxán elegyével végezzük el a hidroxokobalamin elúcióját. 10 g nyers hidroxokobalamin hidrokloridból kiindulva, melynek hatóanyagtartalma 40 Bi2a -bázisban kifejezve 7,48 g 8,71 g hidroxokobalamin-propionátot nyerünk, (amelynek hatóanyagtartalma B12a -bázisban kifejezve 6,97 g) a kitermelés az elméletinek 93,1%-a. 45 50 (3) keresztül vezetjük—el—és vákuummal megszfrvatott szedőben fogjuk fel. Ezután az oszlopot további, a felső nyíláson (!) keresztül bevezetett desztillált vízzel addig mossuk, amíg az alsó csonkon (3) keresztül elfolyó oldat színtelenné válik, ehhez körülbelül 800 mf desztillált víz szükséges. Ezután az (1) és (3) nyílásokat elzárjuk. Az alsó oldalsó bevezetőnyílásra (4) az 1/b. pont szerint készített eluálószert tartalmazó oldószerelegy-tartály vezetékét kötjük, és ezután a felső oldalsó elvezető csonkhoz (8) vákuummal megszívatott szedőt csatlakoztatunk. A (4) és (8) csonkok kinyitásával az eluciót megindítjuk. A lejövő Összetétel %-ban *P3 tí O , OH ano) zenny X o a, ano) zenny 00 • • o w m cd rt w S3 > J: n IN w S3 > •ä - 5 & CG _GO oa cfl z 55 . a kapott termék |a kiindulási anyag - 82,9 0,0 0,4 15,9 77,0 - 5,2 2,6 15,3 60 3. példa: , Hidroxokobalamin-hidroklorid Az 1/d. pont szerint kapott eluátumhoz a 65 mólarányok alapján számított 1,1-szeres mennyi-
