167360. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mindkét láncvégen alfa-aminooxi-karbonsavat tartalmazó ACTH hatású polipeptidek előállítására
15 167360 16 24 ml dioxánt adunk hozzá és annyi 2 n nátriumhidroxidot, hogy enyhén lúgos (pH 8-9) oldat keletkezzék. 6,6 g (45,6 mmól) terc-butiloxikarbonil-azid és 2,3 g (57,5 mmól) magnéziumoxid hozzáadása után a reakcióelegyet 16 órán keresztül 5 szobahőmérsékleten keverjük, majd a szilárd részt kiszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 50 ml vízben oldjuk és háromszor 70 ml etilacetáttal kirázzuk. Az etilacetátos oldat bepárlása után a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, majd a H> nyers terméket (6,35 g) etilacetátból átkristályosítjuk. 3,6 g (60,5%) Líc-aminooxi-e-terc-butiloxikarbonil-amino-kapronsavamidot kapunk, op.: 118-120 C°, Rf = 0,30, [a]D = -39,5° (c = 1, metanol). 15 5. lépés: Tri-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-N2 H 3 20 25,15 g (29,5 mmól) Z-Lys(BOC>Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3-t feloldunk 500 ml metanolban és 5,0 g 10%-os csontszenes palládium-csontszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció be- 25 fejeződése után a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot 180 ml diklórmetánban feloldjuk. Az oldathoz 5,72 ml (41,0 mmól) trietilamint és 10,26 g (36,8 mmól) tritilkloridot adunk. A reakcióelegyet 16 órán keresztül szobahomérsék- 30 léten állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot 300 ml etilacetátban feloldjuk. Az oldatot 50 ml vízzel, háromszor 50 ml 5%-os citromsav-oldattal, háromszor 50 ml 8%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk, majd szá- 35 rítás után bepároljuk és a maradékot petroléter alatt elporítjuk. Szűrés, szárítás után 28 g nyers Tri-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC>OCH3 -t kapunk, ami további tisztítás nélkül 170 ml metanolban feloldunk, hozzáadunk 7,25 ml (150 mmól) hidra- 40 zinhidrátot és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Három nap múlva a metanolt ledesztilláljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A nyers terméket (17,65 g) 35 ml metanol és 350 ml éter elegyéből átkristályosítva 13,85g 45 (49%) védett tetrapeptidhidrazidot kapunk, op.: 197-199 C°, R^ =0,13, [a]D = -7,Í (c = Í, metanol). 6. lépés 50 Tri-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC> -OLys(BOC>NH2 4,1 g (4,27 mmól) Tri-Lys(BOC)-Lys(BOC> 55 -Lys(BOC)-N2 H 3 -ot 14 ml dimetilformamidban feloldunk. A -20C°-ra hűtött oldatba keverés közben becsepegtetünk 6,5 ml (17,0 mmól) 2,6 n etilacetátos sósavoldatot, majd 0,65 ml (5,45 mmól) terc-butilnitritet. A reakcióelegyet 5 percig 60 -10C°-on keverjük, majd -20 C°-ra hűtjük és hozzáadjuk 1,42 g (5,45 mmól) H-OLys(BOC)-NH2 és 2,2 ml (12,8 mmól) diizopropil-etilamin 7 ml dimetilformamidos oldatát. A reakcióelegyet 1 órán át -5 és 0 C° közötti hőmérsékleten keverjük, 65 majd másnapig 0C°-on állni hagyjuk. Ezután az oldatot bepároljuk, a maradékot 140 ml etilacetátban feloldjuk és az oldatot 40 ml vízzel, háromszor 40 ml 5%-os citromsav-oldattal, majd kétszer 40 ml 8%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás után az etilacetátot ledesztilláljuk és a szilárd maradékot éterrel eldörzsöljük. Szűrés, szárítás után 2,75 g (54%) védett, aminooxikarbonsawal helyettesített tetrapeptidamidot kapunk, op.: 137-140 C°, RÍ =0,26, [a]D = -24,4° (c = 1, metanol). 7. lépés: H-Lys(BOC)-Lys(BOC>Lys(BOC)-OLys(BOC)-NH2 HCl 5,0 g (4,22 mmól) Tri-Lys(BOC>Lys(BOC> -Lys(BOC)-OLys(BOC)-NH2 -t 50 ml metanolban feloldunk, 1,7 ml piridinből és 1,7 ml tömény sósavból készített piridin-hidroklorid-oldatot adunk hozzá. A reakcióelegyet 20 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a metanolt ledesztilláljuk és a visszamaradó sűrű masszát 150 ml vízzel átgyúrjuk és a víz leöntése után vákuumban megszárítjuk, majd éter alatt elporítjuk. Szűrés, szárítás után 3,7 g (82%) H-Lys(BOC> -Ly<BOC)-Lys(BOC)-OLys(BOC)-NH2 HCl-ot kapunk, op.: 120-123 C°, R?=0,72, [a]D =+17° (c = 1, metanol). 8. lépés: BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-GluíOBu*)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC>Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC>OLys(BOC>NH2 0,995 g (0,5 mmól) BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-Glu(OBut)-ffis-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC>Pro-Val-Glv-OH HCl-ot, 0,491 g (0,5 mmól) H-Lys(BOC> -Lys(BOC)-Lys(BOC>OLys(BOC>NH2 HCl-ot és 0,800 g (3,0 mmól) PCPOH-t feloldunk 5 ml dimetilformamidban és hozzáadunk 0,055 ml (0,5 mmól) N-metilmorfolint, majd 0,210 g (1,0 mmól) DCC-t. A reakcióelegyet egy napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet 100 ml éterrel hígítjuk. Akicsapódott terméket szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. 1,30 g (90%) > védett, aminooxikarbonsawal helyettesített oktadekapeptidamidot kapunk, R? = 0,50. 4. példa D-OSer-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-D-OLys-NH2 1,2 g (0,417 mmól) BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-Gl u( O Bu* )-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC>Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC>Lys(BOC)-D-OLys(BOC)-NH2 -ot feloldunk 9,6 ml trifiuorecetsav, 1,2 ml víz és 1,2 ml anizol elegyében, majd az oldatot egy órai állás után 240ml éterrel hígítjuk. Akivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, foszforpentoxid 8
