167360. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mindkét láncvégen alfa-aminooxi-karbonsavat tartalmazó ACTH hatású polipeptidek előállítására
9 167360 10 tanolban és 2,75 g 10%-os csontszenes palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük. 3 óra múlva a katalizátort kiszűrjük és a metanol ledesztillálása után visszamaradó olajat petroléter alatt állni hagyjuk. A termék négány óra alatt kristályok alakjában kiválik. Szűrés, szárítás után 3,65 g (96%) D-a-terc-butiloxikarbonil-aminooxi-/?-hidroxipropionsavat kapunk, op.: 94—95 C°, Rf =0,27. 5. lépés: BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-N2 H 3 4,4 g (20 mmól) BOC-D-OSer-t és 9,0 g (20 mmol) H-Tyr-Ser-Met-OCH 3-ot [1212 981 számú NSzK szabadalmi leírás] feloldunk 30 ml dimetilformamidban. Az oldatot 0C°-ra hűtjük és hozzáadunk 2,22 ml (20 mmól) N-metilmorfolint, majd 3,8 g (18,4 mmól) DCC-t. A reakcioelegyet 1 órán át 0 C°-on keverjük, majd másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a DCU-t kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot 400 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatot 2 x 200 ml n sósavval, kétszer 200 ml 8%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, majd szárítás után bepároljuk. A maradékot (8,10 g védett helyettesített tetrapeptidészter) 85 ml metanolban feloldjuk, 2,2 ml (46 mmól) hidrazinhidrátot adunk hozzá és másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Másnap a metanolt ledesztilláljuk, a maradékot etilacetáttal eldörzsöljük, szűrjük, etilacetáttal, éterrel mossuk és tömény kénsav mellett szárítjuk. 7,21 g (63%) védett, aminooxikarbonsawal helyettesített tetrapeptidhidrazidot kapunk. Op.: 174-175 C° (vízből átkristályosítva), Rjl =0,30. Elemzés a C2sH4oN6010 S összegképlet alapján: számított: C =48,7%, H=6,55%, N =13,6%, talált: C = 48,3%, H = 6,6%, N = 13,8%. 6. lépés: BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-GluíOBu*)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-OH • HCl 1,25 g (2,13 mmól) BOC-D-OSer-Tyr-Ser-Met-N2 H 3 -ot feloldunk 15 ml dimetilformamidban. A-20C°-ra hűtött oldatba keverés közben becsepegtetünk 2,08 ml (8,32 mmól) 4 n etilacetátos sósav-oldatot, majd 0,32 ml (2,70 mmól) terc-butilnitritet., A reakcioelegyet 5 percig -lOCf-on keverjük, majd —20 C -ra hűtjük és hozzáadjuk 2,78 g H-GluíOBu^-His-Phe-Arg-Trp-Gly-LysíBOC)-Pro-Val-Gly-OH [155 880 számú magyar szabadalmi leírás] és 1,4 ml (8,13 mmól) diizopropil-etilamin 23 ml dimetilformamidos oldatát. A reakcioelegyet 1 órán át -5 és 0 C° közötti hőmérsékleten keverjük, majd másnapig 0C°-on állni hagyjuk. Ezután az oldatot bepároljuk és a maradékot 8%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal eldörzsöljük. Szűrés, vizes mosás, szárítás után 3,49 g (94%) védett, aminooxikarbonsawal helyettesített tetradekapeptidet kapunk. 4,75 ml tömény sósav és 4,75 ml piridin elegyítésével piridin-hidroklorid oldatot készítünk és hozzáadjuk a 24 ml metanolban szuszpendált védett tetradekapeptidhez. Az így ka-5 pott oldatot 240 ml vízzel hígítjuk, a kivált csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 2,95 g (73%) védett tetradekapeptid-hidrokloridot kapunk, op.: 200-202 C°, R? =0,25. 7. lépés: 15 H-Lys(BOC)-Lys(BOC>OCH3 • oxalát 11,0 g (17,7 mmól) Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3 -t [K. Hofmann és munkatársai: J. Am. Chem. Soc. 86 4991 (1964)] feloldunk 200 ml metanol-20 ban, 2,0 g (22,2 mmól) vízmentes oxálsavat adunk hozzá és 2,0 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 25 9,1 g (89%) dipeptidészter-oxalátot kapunk, op.: 65—67 C° (izopropanol-diizopropiléterből átkristályosítva), R?=0,34, [a]D = +3,79° (c=l, metanol). 30 Elemzés a C25H46 N 4 0ii összegképlet alapján: számított: C=51,9%, H=8,9%, N = 9,7%, 35 talált: C =51,5%, H =7,9%, N = 9,9%. 40 8. lépés: Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3 45 8,1 g (14,0 mmól) H-Lys(BOC)-Lys(BOC>OCH3 . • oxalátot szuszpendálunk 60 ml etilacetátban, 3,1 ml (28,0 mmól) N-metilmorfolint és 6,7 g (14,0 mmól) Z-Ly<BOC>ONSu-t adunk hozzá és két órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. 50 Ezután a besűrűsödött reakcioelegyet 200 ml etilacetáttal és 40 ml vízzel hígítjuk. A vizes fázis leválasztása után az etilacetátos oldatot kétszer 40 ml n sósavval, kétszer 40 ml 8%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, nátriumszulfáton 55 szárítjuk és bepároljuk. A maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, majd a nyers terméket izopropanol-diizopropiléter elegyéből átkristályosítjuk. 8,0 g (67%) védett tripeptid-metilésztert kapunk, op.: 117-118C0, Rí =0,58, [a] D =-17,47° (c=l, 60 metanol). Elemzés a C42 H7oN 6 Oi 2 összegképlet alapján: számított: C =59,3%, H =8,3%, 65 talált: C = 59,7%, H = 8,2%. 5
