167359. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szénhidrát vagy aminosav tartalmú anyagok enzimatikus átalakítására
7 16T359 8 2. példa A példa glükóznak folyamatos konverzióval fruktózzá történő izomerizációját mutatja be, mely eljárás során az 1. példában előállított és -5 C° 5 hőmérsékleten néhány órán át tárolt koagulált sejteket használunk. Fagyasztott koagulált sejteket vízben vagy glükóz-szirupban szuszpendálunk. A sejteket hagyjuk *0 felengedni, majd mechanikus módszerrel finoman összetörjük, ily módon viszonylag egységes részecskeméretet állítva elő. A szuszpenziót ezután kb. 30 percig vákuumban tartjuk, a sejtekből eltávozó gázok eltávolítására. Egy 2,5 cm átmérőjű 15 köpennyel ellátott oszlopot részben vízzel vagy glükózsziruppal töltünk meg, és a gáztalanított szuszpenziót az oszlopba öntjük. A töltött oszlopot 60 C -ra melegítjük, és 2 mólos 8,0 pH-értékű és 0,004 mól MgCl2 -6H 2 0-t tartalmazó glükózol- 20 datot engedünk át az oszlopon, olyan áramlási sebességgel, hogy a kívánt konverziót kapjuk. Ezzel a módszerrel egészen 50%-ig terjedő konverziófok érhető el. 3. példa A példa száraz koagulált sejtek előállítását és 30 ezen sejteknek oszlopos eljárásban, glükóz fruktózzá történő izomerizációjánál való felhasználását mutatja be. A koagulációt kationos és anionos koagulálószer 35 együttes alkalmazásával végezzük. 5 rész friss Arthrobacter-tenyészetet (pH 5,6) 1 rész 1%-os kationos Primafloc C-7 oldattal kezelünk. Akoagulálószert tartalmazó fermentlevet lassan kavarjuk, míg nagy sejt-aggregátumok képződnek. Ezután a 40 szuszpenzióhoz 1 rész 1%-os anionos Primafloc A-10 (anionos koagulálószer karboxilcsoportokat tartalmaz, Rohm and Haas) oldatot adunk, és a keverést a nagy aggregátumok finom részecskékké történő teljes átalakulásáig folytatjuk. A koagulált 45 részecskéket az 1. példában megadottak szerint hagyjuk kiülepedni. A tiszta fermentlevet elválasztjuk és a koagulált sejteket vákuumban végzett szűréssel választjuk el. Az eljárás során a két koagulálószer-oldat pH-ját nátriumhidroxiddal állít- 50 juk be, a kationos Primafloc C-7 oldatát 5 értékre, az anionos Primafloc A-10 oldatát pedig 7 értékre. A koagulált fermentlé végső pH-ja 5,6 körül van. 55 A szűrt sejttömeget megfelelő formán nyomjuk keresztül a mesterséges huzatú szekrényben történő szárítás előtt, ahol a szárítást 55 C° hőmérsékleten 24 óráig végezzük. 60 A szárított anyagot őrlőberendezésben granuláljuk és 20-40 (mesh) finomságú szitán szitáljuk. A granulált szárított sejteket oszlopba töltjük és a glükóz izomerizációját a 2. példában leírt módszerrel végezzük el. 65 4. példa Aspergillus niger ATCC 1004 törzset tenyésztünk glükózt, fruktózt, MgS04 • 7H 2 0-t, KH2 P0 4 -t, (NH 4 ) 2 HP0 4 -t, karbamidot és kukoricalekvárt tartalmazó táptalajon. A fermentáció befejeztével a fermentlé végtérfogatára számítva 0,3% mennyiségben kationos polielektrolitot adunk a fermentléhez. A sejtaggregátumok kialakulásához megfelelő keverést alkalmazunk. A koagulált sejteket elválasztjuk és megfelelő méretű, köpennyel ellátott oszlopba töltjük. A töltött oszlopot 40 C° hőmérsékletre melegítjük és 5%-os invertcukor-oldatot vezetve keresztül rajta, az elfolyó oldat glükonsavat és fruktózt tartalmaz. 5. példa Streptomyces olivaceus NRRL B-3583 törzset tenyésztünk, a következő összetételű táptalajon: 0,7% xilóz 0,3% dextróz 0,5% marhahúskivonat 0,25% élesztőautolizátum 1,0% pepton 0,5% NaCl 0,05% MgS04 • 7H 2 0 0,024% CoCl2 • 6H 2 0 A fermentációt 28 C° hőmérsékleten 24 órán át végezzük. Ezután a fermentléhez 2 s/tf%-os kationos polielektrolit-oldatot adunk, olyan mennyiségben, hogy a száraz koagulálószer végső koncentrációja a fermentleben 0,05 s/tf% legyen. A fermentlevet óvatosan kavarjuk a sejtek koagulálásának elősegítésére. Ezután a kavarás befejezésével a koagulált sejteket hagyjuk kiülepedni. A sejtaggregátumokat az 1. példában megadottak szerint választjuk el. A koagulált sejteket 60 C° hőmérsékleten 24 órán át szárítjuk, majd a szárított sejttömeget enyhe mechanikus őrlésnek vetjük alá, a részecskeméret oszlopban történő használatra alkalmassá tétele miatt. A zúzott sejteket részben 1,0 mólos glükózoldattal töltött köpennyel ellátott oszlopba töltjük. A töltött oszlopot 70 C°-on melegítjük és 1,0 mólos, 0,04 mól/liter MgCl2 • 6H 2 0-t tartalmazó, pH 8 értékű glükóz oldatot vezetünk át rajta, ily módon a glükózt fruktózzá izomerizálva. 6. példa Saccharomyces cerevisiae ATCC 560 törzset tenyésztünk melaszt tartalmazó táptalajon. Megfelelő fermentációs idő elteltével az oldathoz polielektrolit-oldatot adunk, egyidejűleg enyhe kavarást alkalmazva a sejtek aggregációjának elősegítése érdekében. A koagulált sejttömeget elválasztjuk és oszlopos eljárásban használjuk, mikor is az oszlopot 60 C°-ra melegítjük és 0,5 mólos, pH 5,0 értékű szaharózoldatot vezetünk keresztül rajta, miközben a szaharóz invertcukorrá alakul át. 4
