167359. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szénhidrát vagy aminosav tartalmú anyagok enzimatikus átalakítására
167359 10 7. példa Aspergillus oryzae ATCC 1010 törzset tenyésztünk búzakorpát, szénhidrátokat, ásványi sókat és puffert tartalmazó táptalajon. A fermentációt 48 órán át végezzük 30 C° hőmérsékleten, majd ezután megfelelő polielektrolit-oldatot adunk a táptalajhoz. A koagulált sejtek kezdeti aggregációját enyhe kavarással segítjük elő. A koagulált sejteket ezután elválasztjuk és 50 C°-ra melegített köpennyel ellátott oszlopba töltjük. Az oszlopon semleges 0,2 mólos, 5 • 10"4 mól Co++ -iont tartalmazó acetil-DL-metionin oldatot keresztülvezetve, az elfolyó oldat L-metionint tartalmaz. 8. példa Aspergillus niger NRRL 346 törzset 10 liter, 0,5% peptont, 0,3% élesztőextraktumot, 0,3% malátaextraktumot és 3,0% laktózt tartalmazó táptalajon tenyésztünk. A rnicéliumot kiszűrjük, vízzel mossuk majd 8 liter 0,1 mólos nátriumhidrogénkarbonát-oldatban (pH 8,0) szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 160 ml 1,5%-os Primafloc C—7 oldatot (melynek pH-ját előzőleg 8,0 értékre állítottuk) majd 400 ml 1,5%-os Primafloc A-10 oldatot adunk. A keletkezett koagulátumot vákuumszűréssel elválasztjuk, és egy éjszakán át 55 C° hőmérsékleten szárítjuk, majd szitáljuk. 8,6 g száraz koagulátumot (szemcseméret 1—í,4mm) 2,5 cm átmérőjű üvegoszlopba töltünk. A töltött oszlopos 4,5 pH-értékű és 6,5 súly% szárazanyagot (elsősorban laktózt) tartalmazó savas tejsavoldatot vezetünk át 550 ml/nap mennyiségben és 60 C° hőmérsékleten, és elfolyóként laktóz-hidrolízistermékeket tartalmazó oldatot kapunk. A Saktózhidrolízis foka 35%. 9. példa Lactobacillus thermophillus törzset tenyésztünk 7 liter, 2,0% triptofánt, 0,5% élesztőextraktumot, 0,25% zselatin, 0;5% dextrózt, 2,0% laktózt, 0,5% szaharózt, 0,4% nátriumkloridot, 0,15% nátriumacetátot és 0,05% aszkorbinsavat tartalmazó táptalajon. 25 órán át 45 C° hőmérsékleten végzett inkubálás után a fermentlé pH-ját 5,5 pH-értékre állítjuk, és 30 percen keresztül 150 ml toluollal ÄzeliJif V"*1 IÍU* -A seitekst ím 200 ml 1,5%-os C—" lí'^a. h~zzáadásával koaguláltatjuk. A ke i^Jsalt sejíSKtí fcwÍrjuk, és egy éjszakán át 50 C° ! iőnér:skíc'.ín »ssr'tjik. A száraz anyag 4 g-jat 2.5 cm átmérőjű oszlopba . töltjük, és a töltött oszlopon 5%-os 0,02 mólos káliumfoszfátpuff ert tartalmazó (pH 7,0) laktózoldatot vezetünk keresztül. 420 ml/nap folyási sebesség és 55 C° hőmérséklet mellett a laktóznak körülbelül 50%-a hidrolizál glükózzá és galaktózzá. 10. példa Kluyveromyces fragilis (azelőtt Saccharomyces fragilis) törzset tenyésztünk 15 liter, 4,0% laktózt, 5 0,4% diammóniumhidrogénfoszfátot, 1,0% peptont, és 0,5% élesztőextraktumot tartalmazó táptalajon. A tenyészetet 30 percig 75 ml toluollal kezeljük, majd a koagulálást 1100 ml 1,5%-os Primafloc C-7 oldat (pH 5,8) majd 4500 ml 1,5%-os Primafloc 10 A—10 oldat hozzáadásával végezzük. A keletkezett koagulátumot szűréssel elválasztjuk és egy éjszakán át 55 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. A szárított koagulátum lOg-ját 2,5 cm átmérőjű oszlopba töltjük, és a töltött oszlopon 6,3 pH-értékű és 15 7,0 súly% szárazanyagtartalmú édes savóoldatot vezetünk keresztül folyamatosan, a hőmérsékletet 2 C° hőmérsékleten tartva. 550 ml/nap folyási sebesség mellett a jelenlevő laktóz 65%-a hidrolizált glükózzá és galaktózzá. 20 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás szénhidrát- vagy aminosavtartalmú anyagok enzim-katalizált transzformációjára, azzal 25 jellemezve, hogy a szubsztrátot hatékony mennyiségű enzimet tartalmazó, teljes mikroorganizmus sejteket tartalmazó aggregátummal kezeljük, mely aggregátumot ariionos vagy kationos polielektrolit koagulálószerrel állítottunk elő. 30 2. Az 1, igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan aggregátumot alkalmazunk, mely szűrősegédanyagot is tartalmaz. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az 35 aggregátumot az enzim-katalizált reakcióban történő alkalmazása előtt szárítjuk. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az aggregátumot az enzim-katalizált reakcióban tör-40 ténő alkalmazása előtt fagyasztjuk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy szubsztrátumként glükóz-tartalmú oldatot használunk, melyet glükóz-izomerizáló enzimmel fruk-45 tózzá alakítunk. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan aggregátumot használunk, mely Arthrobacter-sejteket tartalmaz. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 50 módja, azzal jellemezve, hogy olyan aggregátumot használunk, mely Streptomyees sejteket tartalmaz. 8. Az 5-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a glükóz-tartalmú oldatot folyamatosan vezetjük át 55 egy> a koagulált sejteket tartalmazó ágyon. 9. A 8. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az ágy hőmérsékletét 50 és 90 C° között tartjuk, a glükóz-tartalmú oldat pH-ját 6 és 10 közé állítjuk be és a glükózt 60 1-50% közötti konverziófokkal alakítjuk át fruktózzá. ff A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 766094 - Zrínyi Nyomda 5
