167342. lajstromszámú szabadalom • Eszköz mikroorganizmusok kimutatására, szállítására, tárolására és táptalajok minőség vizsgálatára

9 167342 10 Az oldószert ezt követően eltávolítjuk, és így kialakítjuk mind a mikropórusos membránt, mind a folyamatos határréteget. Mint már korábban említettük, a találmány szerinti eszköz számos felhasználási lehetőséggel 5 rendelkezik a mikrobiológiában. így felhasználható egyszerűen minőségellenőrzésben mikroorganizmusok alkalmazására, mikroorganizmusok tárolására és szállítására, továbbá tápanyagokat tartalmazó mikrobiológiai indikátorként. Minőségellenőrzés ese- 10 tén szabványosított eszközsorozatot használunk táptalajok, agar-agar gél, stb. sarzsainak vizsgálatára, és megállapítjuk a növekedés megindulásához szükséges organizmusok minimális számát. Ezt a minimális számot az adott rendszer vagy közeg (pl. 15 táptalaj) úgynevezett elkülönítő koefficiensének nevezzük. Például egy adott táptalaj új sarzsát ellenőrizzük standardsorozattal, ahol a standardokban a telepek száma 5 és 100 között változik standardként. Meghatározott és állandó tenyésztési 20 körülmények között a táptalaj csak ez esetben indítja meg, illetve biztosít a továbbiakban tápanyagot a mikroorganizmusok növekedéséhez, ha a standard megfelelő számban tartalmaz mikroorganizmusokat. így ha különböző számú 25 mikroorganizmusokat tartalmazó standardsorozatot használunk, valamilyen táptalaj úgynevezett elkülönítési koefficiense könnyen megállapítható abból a legkisebb számú mikroorganizmust tartalmazó standardból, amelyben állandó, vagyis szabványosí- 30 tott körülmények között a mikroorganizmusok fejlődése megindult. Az elkülönítési koefficienst meghatározó mikroorganizmus-szám megállapítható a minimális inokulumból is. Ha indikátorként használjuk, a laminált szer- 35 kezet tápanyagokat tartalmaz és meg van szárítva. A tápanyagok megválasztása a kimutatni kívánt mikroorganizmustól függ. Vagy az abszorbens szövet, vagy a mikropórusos membrán, vagy mindkettő tartalmazhat tápanyagokat. Ha a kimu- 40 tatást az úgynevezett „mártsd be - inkubáld -olvasd le" technikával végezzük, akkor az indikátort pillanatszerűen a mikroorganizmusok jelentése szempontjából vizsgált folyadékba mártjuk, majd a felesleges folyadékot az indikátorról 45 lefolyni hagyjuk, és az indikátort szabványosított körülmények között előre meghatározott időn át inkubáljuk. Egy másik kísérleti módszer szerint a laminált szerkezetet steril folyadékkal vízfelvételre késztetjük, majd a membrán felületét beoltjuk 50 „bekenéssel", és végül szabványosított körülmények között az indikátort inkubáljuk. A indikátor beoltására további módszer, ha a membrán felületét közvetlenül a vizsgálni kívánt állati, növényi vagy emberi szövettel érintkeztetjük. A 55 membrán puffer zónaként viselkedik, vagyis lehetővé teszi a membrán felületi beoltását, de ugyanakkor megakadályozza a reagensek eluálódását az abszorbens szövetből és behatolását a vizsgált szövetbe. Ez a módszer felhasználható a 60 korábban ismertetett, adott mikroorganizmusra specifikus tápanyagokat vagy táptalajt tartalmazó indikátorral kapcsolatosan, illetve így mutatható ki adott mikroorganizmus az indikátor és a vizsgálni kívánt szövet közvetlen érintkeztetésével. 65 Az indikátort előnyösen valamilyen tartályba vagy tartóba helyezzük az inkubálás idejére, hogy megadályozzuk a folyadék elpárolgását az indikátorból. Az inkubálási időszak alatt a tápanyagokat tartalmazó abszorbens szövetből folyadék jut át a membránon annak felületére, és így a vizsgált folyadékból a membránra jutott mikroorganizmusok a membrán felületén körkörös telepekben nőni kezdenek, minthogy a membrán porózus volta következtében a telepeket felületén tartja. Az inkubálás után a telepeket egyszerűen megszámoljuk, vagy összehasonlítjuk különböző számú telepeket tartalmazó standardok rajzával vagy fényképével. A találmányt közelebbről az alábbi példákkal világítjuk meg. 1. példa 50% étert és 50% alkoholt tartalmazó elegyből 100 ml-ben feloldunk 7 g cellulóz-nitrátot, és a kapott polimer oldathoz desztillált vizet csepegtetünk, míg az zavaros nem lesz. Ekkor az oldatot egy éjszakán át keverjük, majd a kevert oldatból S et S 470 minőségű (gyártó cég: Schleicher and Schnell, Inc., Keene, Amerikai Egyesült Államok) szűrőpapír felületére folyékony filmet öntünk. A szűrőpapírt és a folyékony filmet szobahőmérsékleten egy órán át állni hagyva megszárítjuk. A kapott laminált szerkezet mikropórusos membránjának átlagos pórusátmérője mintegy 0,1 mikrométer, és a határréteg mintegy 5 mikrométer vastag. 2-5. példa Az 1. példában ismertetett módon kapott laminált szerkezetet közel 2 cm x 2 cm nagyságú négyzetekre vágjuk (lásd 1. Ibrán 13, 14, 15 és 16 hivatkozási számot). A kapott négyszögeket az alábbi táptalajokkal itatjuk át: A példa sorszáma Táptalaj Kimutatni kívánt mikroorganizmus 2 Élesztő Candida 3 Indiktáros táptalaj Általában minden patogén mikroorganizmus 4 Tellurit-glicin Staphylococcus 5 S et S táptalaj Salmonella és Shigella Az így kapott négyszögeket elhelyezzük az 1. ábra szerinti 10 indikátor 12 alapelemében. Az indikátort pillanatszerűen a vizsgálni kívánt vizeletmintába mártjuk, majd a felesleges vizeletet lerázzuk, az indikátort Petri-csészében elhelyezzük, és 37 C°-on 18-24 órán át inkubáljuk. Az alábbi eredményeket kapjuk: 5