167313. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirimidin-származékok előállítására
167313 2. Haematológiás fázis. Ez alatt a szakasz alatt a parazitákat könnyen megkülönböztethetjük May Grünwald Giemsa festékkel, vagy krezü bíborral megfestett lemezen. A parazita szint mindaddig növekszik a vérben, amíg az állat el nem pusztul. Azt tapasztaltuk, hogy ebben a stádiumban az anaemia mértéke 1,5* 106 eritrocita számig haladt előre. 3. A betegség teljes kifejlődésének szakasza. Az eredményekből minden egyes vegyületre vonatkozóan megállapítottuk az aktivitási indexet. Az aktivitási indexet oly módon kapjuk meg, ha az LD50 -et (vagy ennek hiányában az MTD értéket) 5 az ED50 értékkel elosztjuk: LD50 (MTD) 10 ED 50 Az összehasonlítás során az alábbi eredményeket kapjuk: Ez a szakasz a fertőzést követő 6. napon kezdődik. Az állat súlya fokozatosan csökken, 1S apátiába esik, a szőre felborzolódik, majd a fülek pjjj. és a szemek elszíneződnek. Intraperitonealisan Orálisan 74 metamin 0.50 148 128 128 4. Végső szakasz. Ez a szakasz a fertőzést követő 8. napon kezdődik. Az egerek teljesen elszíneződnek, fejük lecsüng a mellső lábak között, a gerinc kiáll, az állatok a táplálékot visszautasítják, hátsó részük megbénul, légzési zavarok és görcsök jelentkeznek, majd beáll a halál. 15 nap elteltével mindegyik állat elpusztult. A vizsgálatok során a B8270 és B8370 jelzésű találmány szerinti vegyületeket pirimetaminnal hasonlítottuk össze. A vizsgálatokat az alábbi körülmények között végeztük: Az állatokat 10-es csoportokra osztottuk. A kontroll állatokat parazita-tartalmú szuszpenzióval oltottuk be, azonban az állatok semmilyen kezelést nem kaptak. A preventív kezelés során a vizsgálati anyagot 24 órával a fertőzést követően adtuk be. A terápiás kezelés során a vizsgálati anyagot 4 nappal a fertőzést követően adtuk be. A betegség fejlődését a fertőzést követő naptól kezdve festett kenetekkel ellenőriztük, a vizsgálatot két naponként folytattuk egy hétig, majd a vizsgálatot legalább egy hónapig hetente egyszer megismételtük. A vizsgálati vegyületet hat egymást követő napon adtuk be. Az állatokat abban az esetben tekintettük parazitától mentesnek, amikor 50 egymást követő mikroszkópos vizsgálat negatív eredményt mutatott, és amikor az állatról levett vérrel további fertőzést nem lehetett előidézni. A vizsgált vegyületet abban az esetben tekinthetjük hatásosnak, hogyha a kezelt állatok legalább 15 nappal túlélik az utolsó kontroll állat pusztulását. Ezt a dózisértéket EDS0 -el, azaz 50%-os hatásos dózissal jelöljük. A vizsgálatok során alkalmazott három vegyület dózisértékét oly módon állapítottuk meg, hogy ezek a pirimetamin bázisra vonatkoztatva ekvimolekuláris mennyiséget tartalmazzanak. A vizsgálati eredményeket az I., II., III. és IV. táblázatok szemléltetik, melyek a leirás végén találhatók! 20 25 B 8270 >lftX) ±>1500 B8370 > 15^ = >3000 ^^ooo >3291=>20 oo 1.5 Az eredmények azt mutatják, hogy a három vegyület esetében az EDS0 érték egymáshoz közel áll, legkedvezőbb értéket a B 8370-es vegyület mutatja. Ezzel szemben az aktivitási index 30 jelentékeny mértékben kedvezőbb a B 8270 és a B 8370-es vegyületek esetében, minthogy ezek a vegyületek kivételesen alacsony toxicitást mutatnak. Plazmódium gallineaceucummal szemben muta-35 tott hatás ellenőrzésére további antiprotozán vizsgálatokat végeztünk. Ezekhez a vizsgálatokhoz 15 napos csirkéket alkalmaztunk, az állatoknak egy 10 napos fertőzéssel rendelkező csirke vérét intramuszkulárisan 40 adtuk be. A fertőzést követő 10-12. napon az állatok 40-50%-a elpusztult, a túlélők vérében ezt követően a parazitaszint csökkent. A 25. és a 30. nap között újabb pusztulási hullám lép fel. 45 Végül az állatoknak csak 30%-a éli túl a fertőzést. Az állatok terápiás kezelését intraperitoneális úton 8 egymást követő napon végeztük el. Mint az előző vizsgálatok során is, az állatokat 10-es csoportokra osztottuk és összehasonlító 50 anyagként pirimetamint alkalmaztunk. Az eredményeket a parazitaszint és a pusztulási % alapján értékeltük. A preventív vizsgálatoknál a vizsgálati anyagot két nappal a fertőzést követően adtuk be az 55 állatoknak. A terápiás vizsgálatoknál a vizsgálati anyagot 7 nappal a fertőzést követően adtuk be. Ez esetben a kezelt állatokat és a túlélő kontroll állatokat a 27. napon ismételt plazmódiumot tartalmazó intra-60 muszkuláris injekció beadásával fertőztük, majd az eredményeket a 11. napon a vér parazita szintje és az elpusztult állatok száma alapján értékeltük. A pirimetaminnal és B 8370-es vegyülettel végzett vizsgálatok eredményét az V., VI. és VII. 65 táblázatok foglalják össze. 3
