167273. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetoxi-cefalosporin C előállítására
167273 3 4 rán át szobahőmérsékleten keverjük, ez alatt az idő alatt a nem állandó vegyületek bomlanak. Ezt követően előnyös bázissal, például nátriumhidroxiddal 6,0-ra állítjuk be a tenyészlé pH-ját. A micéliumokat és az egyéb oldhatatlan anyagokat szűréssel elkülönítjük, a szűrletet további szennyezőanyagok eltávolítására vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel extraháljuk. A vizes, még szennyezőanyagokat tartalmazó oldatból kromatográfiával különítjük el a dezacetoxi-cefalosporin C-t. Először aktív szénnel kezeljük a vizes oldatot. Az aktív szénből készült oszlopot a szennyezőanyagok eltávolítására vízzel mossuk, majd a hatóanyagot 50%-os vizes acetonnal eluáljuk. Az eluátumot töményítjük és anioncserélő gyantából készült oszlopon kromatografáljuk; az oszlopról előnyösen 0,15 n nátriumacetát oldattal eluáljuk a dezacetoxi-cefalosporin C-t. Az eluátumot ezután desztilláljuk vagy liofilezzük, amikor száraz desztillációs maradékként nyers dezacetoxi-cefalosporin C-t kapunk. A nyersterméket cellulózból vagy szilikagélből készült kromatografáló oszlopon tovább tisztítjuk. A dezacetoxi-cefalosporin C-t tartalmazó eluátumokat vagy kistérfogatú sűrítmény előállítására töményítjük, vagy száraz maradékig desztilláljuk. A sűrítményt vagy a száraz, szilárd halmazállapotú desztillációs maradékot lehető legkisebb mennyiségű izo-propanolban oldjuk, az oldatot pedig a dezacetoxi-cefalosporin C nátriumsójának előállítására dietiléterbe öntjük, amikor a termék kiválik az oldatból. A találmány szerinti eljárás során használt mikroorganizmusok az Emericellopsis kivételével a szexuál-spórákat nem termelő organizmusokat magában foglaló Fungi imperfecti osztályba tartoznak. Az osztályon belül a Moniliales rendbe, a Moniliaceae családba és a Cephalosporium, Scopulariopsis, Paecilomyces és Diheterospora nemhez tartoznak. A találmány szerinti eljárás során használt aszkosporákat termelő mikroorganizmusok az Emericellopsis fajhoz tartoznak, ahol a Cephalosporiumok teljesen kifejlődött szexuális szaporodása figyelhető meg. Fentiek alapján az organizmusok az Ascomycetes-ek Eurotiales rendjén belül az Eurotiaceae családba sorolhatók. A találmány szerinti eljárás során használt gombák fenti osztályozása azok morfológiai és kulturális tulajdonságain alapszik. A továbbiakban a fenti fajok jellemző gombáinak rendszertani szempontból fontos tulajdonságait ismertetjük. A „Maerz és Paul színskála" színeit Maerz és Paul, „Dictionary of Color" című, McGraw-Hill Book Co., Inc., New York (1950) kiadású művében találhatjuk meg. A gombák osztályozását a következő irodalmi forrásokban megadottak szerint végeztük: Gams, Walter: Cephalosporium-Artige Schimmelpilze (Hyphomycetes) Stuttgart, G. Fisher Verlag, 1971. Brown, A.H.S. és G. Smith: The genus Paecylomyces Bainier and its perfect stage, Byssochlamys Westting. Trans. Brit. Mycol. Soc, 40, 17—89, 1957. Bessey, E.A.: Morphology and Taxanomy of Fungi. Blakiston, 1950. Raper, K.B. and C. Thom.: A Manual of the Penicillia, Wilkins and Wilkins Co. 1949. Barron, G.L.: The genera of Hypomycetes from soil. Williams and Wilkins Co. 1968. 5 Az alábbiakban megadott taxonómiai ismertetésben szereplő táptalajok összetétele a következő: Malátakivonat-agar: 20 g dextróz, 20 g malátaextraktum, 1 g pepton, 20 g agar, és 1 liter desztillált víz, 5,6 pH-érték (pH-állítás nem szükséges). 10 Czapek folyékony agar: 3,0 g NaN03, 1,0 g K2 HP0 4 , 0,5 g MgS0 4 .-7H 2 0, 0,5 g KCL, 0,01 g FeS04.7H 2 0, 30,0 g szacharóz, 15,0 g agar, és 1,0 liter desztillált víz, pH 5,5 (pH-állítás nem szükséges). 15 Burgonya-dextróz agar: 200 g burgonyapép, 20 g dextróz, 15 g agar, és 1 liter víz, pH 5,5 értékre állítva. Módosított V—8-agar: 1,0 mannit, 5 g maltóz, 2,0 g élesztőextraktum, 0,5 g kalciumkarbonát, 20,0 g 20 agar, 800 ml desztillált víz, 200 ml szűrt V—8 táptalaj. A többi, meghatározásra használt táptalaj leírása a fenti irodalmi hivatkozásokban található. A Cephalosporiumok általános morfológiai leírá-25 sa. A spóraképző sejtek közvetlenül a vegetatív hifákból vagy a hifák alkotta szövedékből vagy a korémiából kiinduló fialidák. Ezek világos színűek, fokozatosan elvékonyodók és végeiken fialospórá-30 kat hordoznak, amelyek vagy egy gömbön belül, vagy törékeny láncokban állnak. A spórák általában nem szeptáltak, alakjuk gömbölydedtől rövid hengeresig változik. A kolóniák különbözők, légmicélium nélküli, sima és nedves felszínűtől szem-35 esés és légmicéliumoktól vattaszerű felszínűek lehetnek. A micélium általában hifafonalak tömegéből áll. A kolóniák színe fehér, sárgástól rózsaszínig és sötétszűrkétől barnáig változik. A Cephalosporium törzsnek morfológiai és kul-40 turális tulajdonságai. Az alábbi rendszertani leírás szerint a Cephalosporium fajok tenyészeteiben a Cephalosporium nemre jellemző tökéletlen fejlődési fok figyelhető meg. A Cephalosporium NRRL 5445 jelű faj leírása: 45 A spóraképző sejtek nem elágazó fialidákon fejlődnek, amelyek rendezetten helyezkednek el és a hifaszövedékből emelkednek ki. A fialidák lényegében azonos átmérőjűek, a végük felé fokozatosan elvékonyodnak. A fialidák egy sejtből állnak, alap-50 juknál átlagosan 2,8,« átmérőjűek, hosszuk 14 fj, és 25 [i között változik, átlagosan 21 JX. A fialospórák általában láncokban állnak, de öreg tenyészetekben gömbökben is elhelyezkedhetnek. A fialospórák színe világos, de tömegben világos okkersárga, sárgás-55 rózsaszínűek (Maerz és Paul színskálája: 2—9A). A fialospórák mérete 1,4—4,2 és 2,8—4,9 (j, között változik, átlagosan 2,4x3,5 fi nagyságúak. A spórák alakja poliszimmetrikus, oválistól hengeresig. 60 A gombák növekedése különböző táptalajokon különböző. Tápanyagban gazdag táptalajon, például V8 jelű leves-agaron és laktóz-glicerin-pepton-agaron az organizmusok gyorsan növekednek, a kolóniák 65 átmérője a 10. napon meghaladja az 50 millimétert. 2
