167271. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoporton alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak és peptidek előállítására

167271 8 vagy egy acetilén-kötést tartalmazó alkinol-fenilkarbonát (II általános kópletű vegyület) reakciójával állítjuk elő. A védett aminocsoporttal rendelkező aminosav előállítását az alábbi módon végezzük. Ha az I általános képletű vegyület előállításához II általános képletű halogénformiátot, például klórformiátot használunk, az észtert a kívánt aminosav nátriumsójának vizes oldatához adjuk körülbelül 0 °C és 15 °C közötti hőmérsékleten. A reakcióelegyet körülbelül 12 órán keresztül keverjük, ezalatt a hőmérsékletet szobahőmérsékletre hagyjuk emelkedni. A vizes reakcióelegyet éterrel mossuk, majd tömény sósavval körülbelül pH=l értékre savanyítjuk. A termék a megsavanyított vizes elegyből vagy szilárd vagy olajszerű alakban válik le. Ha az alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavreakciótermék szilárd csapadék, leszűrjük és alkalmas oldószerből végzett kristályosítással tisztítjuk. Ha az N-védett aminosavat olajszerű vagy félig szilárd csapadék alakjában kapjuk, kristályos aminsó alakjában különíthetjük el és tisztíthatjuk meg az alábbi módon. A levált olajszerű anyagot alkalmas oldószerrel, például etilacetáttal extraháljuk a vizes savas reakcióelegyből és az extraktumot vízzel mossuk és szárítjuk. A szárított extraktumot szárazra pároljuk és az olajszerű maradékot éterben felvesszük. Az éteres oldathoz valamely bázikus szerves amint adunk, így az alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosav kristályos aminsóját kapjuk. Értékes aminsókat állíthatunk elő szerves aminokkal, így trietilaminnal, dibenzilaminnal, diciklohexalimannal, 1,4--diazabiciklo(2,2,2) oktánnal és hasonlókkal. Előnyösen diciklohexilamint alkalmazunk aminként. Az N-védett aminosavak aminsóit alkalmas oldószerből vagy oldószerelegyből végzett átkristályosítással tovább tisztíthatjuk. így például a diciklohexilaminsókat előnyösen éter és pentán elegyéből kristályosítjuk át. Az I általános kópletű vegyületeket hasonlóképpen állíthatjuk elő valamely aminosav és acetilén-kötést tartalmazó karbinol aktív karbonátjának (II általános képletű vegyület) a reakciójával, ahol R3 fenoxi- vagy szubsztituált fenoxigyököt jelent. Ha a II általános képletű fenil-szénsavésztert valamely aminosavval reagáltatjuk, a reakciót az alábbi módon végezzük. Az aminosavat és az acetilén-kötést tartalmazó alkinol-szénsavésztert vízből és valamely segédoldószerből, így valamely alkoholos oldószerből, például izopropanolból, tercier butanolból, izoamilalkoholból és más alkalmas alkoholos oldószerből álló oldószerelegyben oldjuk fel. Valamely hidrogénhalogenid akceptort, így valamely tercier amint, például trietilamint adunk hozzá és a reakcióelegyet körülbelül 2—8 órán keresztül keverjük körülbelül 45 °C és 75 °C közötti hőmérsékleten. A védett aminocsoporttal rendelkező aminosav reakcióterméket oly módon különítjük el, hogy a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk és az olajszerű maradékot vízben feloldjuk. Az oldatot valamely szerves savval, például ecetsavval vagy citromsavval pH:3 értékre savanyítjuk és az olajszerű csapadékot etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot, mossuk és szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk így alkinil-oxi-karbonil-csoporttal védett ami-5 nosavat kapunk olajszerű maradék vagy szilárd maradék alakjában. Az így kapott reakcióterméket tovább tisztíthatjuk mint N-védett aminosavat szabad sav alakjában vagy aminsója alakjában ugyanolyan módon, amint azt a fentiekben a halo-10 génformiátok esetében leírtuk. Az N-védett aminosavak és azok aminsóinak előállítását még részletesebben a példákban ismertetjük. Az így kapott védett aminosavakat peptidek 15 szintézisében használhatjuk fel. A védett aminocsoporttal rendelkező aminosav szabad karboxilesoportját valamely más aminosavval vagy pepiiddel reagáltathatjuk, amely szabad aminocsoporttal rendelkezik, így di- vagy magasabbrendű peptidek 20 amid-kötését hozzuk létre. A reakciót általában úgy valósítjuk meg, hogy először a kondenzálandó aminosav aktív észterét állítjuk elő. Ilyen alkalmas észter például az N-védett aminosav 2,4,5-triklórfenilésztere. 25 Eljárhatunk úgy is, hogy először a nem védett aminosav aktív észterét állítjuk elő és annak aminocsoportját védhetjük meg az alkiniloxi-karbonilvédőcsoporttal. A találmány szerinti eljárásban a peptidek szintézisében általánosan alkalmazott ami-30 nosavak aktív észtereit alkalmazhatjuk. így például az N-hidroxi-szukcinimiddel készített észtereket, szubsztituált fenilésztereket és különösen a 2,4,5--triklórfenil- és pentaklórfenilésztereket használhatjuk. 35 A találmány kényelmes módszert nyújt alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak fenilvagy szubsztituált fenilésztereinek előállítására. Ha acetilénkötést tartalmazó karbonil II általános képletű szénsavészterét (R3 fenoxi- vagy szubsztituált 40 fenoxicsoportot jelent) alkalmazzuk valamely alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosav előállítására, a reakció mellékterméke fenol vagy szubsztituált fenol. A reakcióelegyben az alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosav mellett je-45 lenlevő fenolos mellékterméket az N-védett aminosav szabad karbonsavcsoportjával reagáltathatjuk oly módon, hogy a reakcióelegyhez valamely alkalmas kondenzálószert adunk, így diciklohexilkarbodiimidet, így az alkiniloxi-karbonil-csoporttal vé-50 dett aminosav fenil- vagy szubsztituált fenilészteret kapjuk. Ezután az alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavésztert elkülönítjük és a peptidszintézisben való felhasználás céljából tisztítjuk. így például ha valamely acetilénkötést tartal-55 mázó karbinol II általános képletű szénsavészterét reagáltatjuk a fentiekben ismert módon a kívánt aminosavval, alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavat és valamely fenolt vagy szubsztituált fenolt tartalmazó reakcióelegyet kapunk. Az elegyet 60 bepároljuk, a maradékot vízzel kezeljük és valamely gyenge savval, így citromsavval körülbelül pH :3 értékre savanyítjuk. A megsavanyított oldatot alkalmas szerves oldószerrel, így etilacetáttal extraháljuk és az extraktumot mossuk és szárítjuk. 65 Ezután az extraktumot bepároljuk, így az N-védett 4