167271. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoporton alkiniloxi-karbonil-csoporttal védett aminosavak és peptidek előállítására
167271 25 26 észtert kapunk, N,N-diciklohexil-karbodiimid hozzáadása után, a termék olvadáspontja 97—98 °C. Elemzési eredmények a C17 H 18 N0 4 C1 3 S képlet alapján: számított: C% 46,54, H% 4,14, N% 3,19, 0% 14,59, Cl% 24,24, S%7,31; talált: C% 46,48, H% 4,30, N% 3,38, 0% 14,40, Cl% 24,09, S% 7,59. 27. példa N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-fenilalanin N-hidroxi-szukcinimidésztert a következőképpen állíthatunk elő: 4,56 (0,01 mól) N-(3-metil-l-butin-3-il-3-oxikarbonil)-L-fenilalanin-N,N-diciklohexilaminsót 20 ml etilacetátban szuszpendálunk és az oldatot kirázzuk kétszer 20 ml 10%-os citromsav-oldattal és 20 ml 10%-os nátriumklorid-oldattal. A mosott oldatot vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 25 ml tetrahidrofuránban és az oldatot 1,15 g (0,01 mól) N-hidroxiszukcinimiddel, majd 2,06 g (0,01 mól) N,N-diciklohexil-karbodiimiddel kezeljük. Az elegyet 3 órán át 0 °C-on keverjük, majd éjszakán át 4 °C hőmérsékleten pároljuk. A dieiklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűr letet vákuumban bepároljuk, így habszerű anyagot kapunk. A terméket kloroform és petroléter elegyéből kristályosítva 3,0 g (78%) végterméket kapunk, amelynek olvadáspontja 128—130 °C. Elemzési eredmények a C19 H 20 N 2 O 6 képlet alapján: számított: C% 61,28, H% 5,41, N% 7,52, 0% 25,78; talált: C% 61,07, H% 5,68, N% 7,79, 0% 25,50. A III általános képlet körébe tartozó peptidek előállítása Az alábbi példák a találmány szerinti peptid-szintézis módját szemléltetik. 28. példa N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-triptonl-L-leucin-metilésztert a következőképpen állíthatunk elő: 37,18 g (75 mmól) N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-L-triptofán-diciklohexilaminsót 150 ml etilacetátben szuszpendálunk és a szuszpenziót kirázzuk kétszer 100 ml 10%-os citromsav-oldattal és 10%-os nátriumklorid-oldattal. A megmosott oldatot ezután vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és a megszárított oldatot vákuumban olajszerű anyaggá bepároljuk. Az olajszerű anyagot 50 ml dimetilformamidban feloldjuk és az oldatot — 15 °C-ra hűtjük. A hideg oldatot hozzáadjuk 9,10 g (50 mmól) L-leucin-metilészter-hidroklorid és 5,5 ml (50 mmól) N-metil-mofolin 50 ml dim etilformamiddal készített oldatához —15 °C-on. Az elegyet éjszakán át —13 °C-on keverjük, majd 2,1 g (25 mmól) nátriumhidrogénkarbonát vizes oldatával kezeljük. Több óra múlva az oldatot keverés közben 1,5 liter hideg nátriumklorid-oldatba öntjük. A keletkező gumiszerű anyagot 500 ml etilacetáttal extraháljuk, az extraktumot kétszer 200 ml 1 n nátriumhidrogén-oldattal és háromszor 200 ml vízzel mossuk, majd nátriumszulfát felett szárítjuk. 5 A megszárított extraktumot vákuumban bepároljuk és a maradékot éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk. így 14,11 g terméket kapunk amorf szilárd anyag alakjában. Vékonyrétegkromatogram: egy folt (klór-toluidin); Rf 0,81 [kloroform -10 (metanol-ecetsav (75:24:1)], MMR-spektrum I I I (CDClg) ö 0,84 (M, 7, C-CH3 és C—CH Leu), 1,43 I I I I 15 (M,2, ß—CH2 Leu), 4,52 (g,a—CH Trp), 5,41 I I -M,a—CH Leu), 6,13 (d,a = NH Trp), 8,30 (M,« = ! = NH Leu). 20 Elemzési eredmények a C24H 31 N 3 0 5 képlet alapján: , számított: C% 65,29, H% 7,08, N% 9,52, 0% 18,12; talált: 25 C% 65,36, H% 7,20, N% 9,68, 0% 18,03. 29. példa N-(3-Metil-l-butin-3-oxikarbonil)-0-terc-butil-L-szeril-L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-glutaminil-30 -L-aszparaginsav-terc-butilószter-dihidroklorid 2,53 g N-(3-metil-l-butin-3-oxikarbonil)-0-terc-butil-L-szerin-diciklohexilaminsó etilacetáttal készített szuszpenzióját kirázzuk 10%-os citromsavoldattal, majd 10%-os nátriumklorid-oldattal. 35 A megmosott oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk, majd vákuumban olajszerű anyaggá bepároljuk. Az olajszerű anyagot 15 ml dimetilformamidban feloldjuk és az oldatot — 15 °C-ra hűtjük. A hideg oldathoz hozzáadunk 0,65 ml N-metilmor-40 fölint és 0,69 ml izobutil-klórformiátot, és az oldatot 15 percen keresztül — 15 °C-on keverjük. A reakcióelegyet beleöntjük 3,05 g (3,5 mmól) L-arginil-L-arginil-L-alanil-L-glutaminü-L-aszparaginsav-terc-butilészter-dihidroklorid 25 ml dimetilfor-45 mamiddal és 5 ml ecetsavval előzőleg elkészített —15 °C hőmérsékletű oldatába. Az elegyet négy órán keresztül —15 °C-on keverjük, majd 66 órán keresztül —15 °C hőmérsékleten tároljuk. 800 ml hideg étert adunk hozzá; a terméket leszűrjük és 50 a szűrőn éterrel és telített nátriumklorid-oldattal mossuk. A terméket metanolban feloldjuk és az oldatot vákuumban szárazra pároljuk. A visszamaradó terméket a víz azeotrop eltávolításával szárítjuk 20 ml benzol hozzáadása útján. A visszamaradó só-55 nyomokat úgy távolítjuk el, hogy a megszárított terméket forró dimetilformamidban feloldjuk és a forró oldatot szűrjük. Ezután a leszűrt oldatot vákuumban bepároljuk. A visszamaradó terméket metanolban feloldjuk és éter hozzáadásával kristá-60 lyos csapadék alakjában kapjuk. A terméket leszűrjük és vákuumban szárítjuk, a hozam 2,57 g (71,5%). Vékonyrétegkromatogram (klórtoluidin): Rf 0,39 (butanol-ecetsav-víz 100:10:31), NMR-spektrum (DMSO) ő 1,11 (s, 9 O-terc-butiléter), 65 1,37 (S, 9 O-terc-butilészter), 1,60 (S, (\ = C(CH3 ) 2 ), 13
