167266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás S-adenozil-L-metionin- tri-p-toluolszulfonát és e vegyületét hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
167 266 7 8 hidrogén formájú Amberlite IRC 50 műgyantával töltött oszlopon adszorbeáljuk, és a 3. példa szerinti módon normál kénsavval eluáljuk. A SAM-tartalmú frakciókat addig kezeljük BaCOg-mal, míg a szulfátok mólkoncentrációja a SAM-óval azonos lesz. Az oldatot szűrjük, a szűrletet 500 ml-re betöményítjük. A sót acetonnal kicsapjuk. A kapott só elemzési adatai: szulfátok 28,2% SAM 58,9% H2 0 5 % A só 10 g-ját 120 ml vízben oldjuk, az oldatot hidroxil formájú Amberlite IRA 900 gyantával kezeljük, míg a szulfátionok eltűnnek az oldatból. A gyantát kiszűrjük, és az oldathoz 14,7 g p-toluolszulfonsavat adunk, azután a keveréket 60 ml-re töményítjük be, és acetonnal kicsapjuk a SAM p-toluolszulfonátot. A termék jellemzői megegyeznek az 1. példa szerinti termék jellemzőivel. A SAM-ra vonatkoztatott hozam: 63%. 6. példa 1 g SAM-jodidot (600 mg SAM) 10 ml vízben oldunk, és az oldatot 0 °C-on hidroxil formájú Dowex 50 ioncserélő gyantával kezeljük, míg a jodidionok eltávoznak az oldatból. A gyanta kiszűrése után 1,5 g p-toluolszulfonsavat adunk az oldathoz, a keveréket 6 ml-re betöményítjük, és acetonnal kicsapjuk a SAM tri-p-toluolszulfonátot. A termék analitikai jellemzői azonosak az 1. példa szerinti termékével. A SAM-ra vonatkoztatott hozam: 75%. A biokémiai kutatások alapján néhány éve ismeretes, hogy a SAM az élő szervezetekben az egyetlen specifikus metil-donor a metilcsoport átvitelével kapcsolatos biokémiai reakciókban, amelyek alapvető jelentőségűek a zsír-, fehérje- és szénhidrát anyagcserében. Példaként az alábbi fontos SAM-tól függő metilcsoport átviteli reakciókat említjük: a) N-transzmetilezés: adenin, karnitin, karnozin, kreatin, 2,6-diaminopurin, adrenalin, guanin, hordenin, N'-nikotinamin, nikotin, foszfatidil-kolin, ricinin, b) O-transzmetilezés: N-acetilszerotonin, dopamin, epinin, d-adrenalin, 1-adrenalin, koleszterin, ergoszterin, 1-norarenalin, pektin, ubikinon, c) S-transzmetilezés: 2,3-dimerkaptopropanol, H2 S, metionin, metilmerkaptán, S-merkaptopropionsav, S-merkaptoetanol, tiopirimidin, tiouracil, d) C-transzmetilezés: citozin, tinin. Az emberi szervezet szempontjából ez azt jelenti, hogy a SAM szerepet játszik az alábbi anyagcserefolyamatokban: kolin és foszfatidil-kolin bioszintézise, SH-csoportokat igénylő enzimek aktiválása, katechinaminok, biogén centroencefalikus aminők, szeretonin, hisztamin, B12-vitamin és fólsav, kreatin, miozin, hisztonok, RNA, DNA, fehérjeanyagok, szteroidhormonok, elsősorban ösztrogének és trigliceridek anyagcseréje. Ismeretes az is, hogy a SAM a metiltranszferáz enzimmel való demetilezés után S-adenozilhomociszteiné (SAO) alakul át, mely utóbbi vegyület hidroszulfid csoportok indirekt donora, és így meghatározó jelentősége van minden olyan vegyület anyagcseréjében, amely biológiai aktivitásának kifejtéséhez SH-csoportot igényel. Ezek közül különösen jelentősek egyes bioenzimek és a kéntartalmú aminosavak. 5 A SAO dekarboxileződik a szervezetben, és a dekarboxilezett termék az aminopropil-csoport legfőbb donora, amely a legújabb biokémiai ismeretek szerint nélkülözhetetlen a poliaminok bioszintézisében. 10 A folyamatot sokféle enzim, közöttük az aminopropiltranszferáz katalizálja. Összefoglalva elmondhatjuk, hogy a SAM ismereteink szerint az emberi szervezetben lejátszódó alábbi biokémiai reakciókkal áll szoros kapcsolat-15 ban: A — transzmetilezés (a CH3 csoport specifikus termelése) B — transzszulfurálás (az SH csoport specifikus termelése) 20 C — transzaminopropilezés (az aminopropil csoport specifikus termelése) Az említett ismeretek összessége arra engedett következtetni, hogy a SAM gyógyászati hatással rendelkezhet olyan patologikus esetek kezelésében, 25 amelyek a fent felsorolt anyagoknak a szervezetben való hiányából erednek. A SAM rendkívüli bomlékonysága és a SAM stabilizálására alkalmas módszerek eddigi hiánya azonban megakadályozta e vegyület farmakológiai és 30 klinikai vizsgálatát és ezzel a gyógyászatban való gyakorlati alkalmazását. Csak a találmány szerinti eljárás tette lehetővé, hogy szobahőmérsékleten korlátlan ideig állandó SAM sóval (SAM tri-p-toluolszulfonáttal) rendszeres farmakológiai és klinikai 35 vizsgálatokat végezzünk. A vizsgálatok ahhoz a felismeréshez vezettek, hogy a SAM mind gyógyászati hatásában, mind hatásának erősségében meglepően jó tulajdonságokkal rendelkezik. Az új vegyülettel kapcsolatban összegyűlt nagy mennyiségű 40 farmakológiai és klinikai vizsgálati adatból csupán néhányat közlünk, ezek azonban kellően megvilágítják a szakember számára a találmány szerinti új vegyület lényeges gyógyászati tulajdonságait. A toxicitás vizsgálata 45 A SAM tri-p-toluolszulfonát teljesen akut toxicitást, krónikus (toxicitást, helyi intoleranciát és mellékhatást egyáltalán nem mutat. Nevezetesen a vegyület DL50 értéke egéren és patkányon 5 g/kgnál nagyobb. 50 A tolerancia- és a krónikus toxicitás-vizsgálatokat Wistar és Sprague—Dowley patkányokon végeztük. 12 hónapon át naponta 2—10 mg/kg-ot adtunk be a vegyületből. A kezelés után a különféle szervek és szervrendszerek nem mutattak sem-55 milyen patalogikus elváltozást. A teratogen hatás vizsgálatát nyulakon és patkányokon végeztük. A SAM tri-p-toluolszulfonát igen nagy dózisainak, a terápiás maximum tízszeresének megfelelő dózis beadása esetén sem tapasztaltuk 60 az embrió vagy kialakult magzat eltorzulását. Azok a túlélő humán limfociták vagy egérmájsejtek, amelyekhez a vegyület 0,1-—0,2 mg/ml-ig terjedő dózisát adtuk, nem mutattak semmi változást a sejtelemek károsodási indexe szempontjából. 65 A vegyület intravénás adagolás esetén 20 mg/kg-4
