167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
167238 79 80 keletkezik. Op.: 181—183°; [<x]D = —16,5° (c = = 2,0, dimetilformamidban); Rf? = 0,65 (szilikagélen). 12. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NH-NH2 6 g BOC-Cys(Bzl)-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N2H 2 -Z vegyületet —40°-on 700 ml száraz folyékony ammóniában oldunk. Az ammónia forráspontján keverve 973 mg nátriumot adunk hozzá úgy hogy a reakcióelegy színe csak világoskék legyen. 25 perc múlva a reakció teljesen befejeződik. Még 10 percig keverjük a kék szín megtartása mellett, majd 2,4 ml jégecetet adunk hozzá és nagy vákuumban (kb. 1 Hgmm-en) szárazra pároljuk. A maradékot egy óráig 0°-on 12 ml vízzel, 3,2 ml jégecettel és 20 ml etilacetáttal keverjük, a csapadékot leszűrjük, kétszer 10 ml 1%-os ecetsavoldattal és egyszer 10 ml etilacetáttal mossuk ós nagy vákuumban szárítjuk. Rf _ = 0,65 (szilikagélen). 9. BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N 2H 2 -Z 9,2 gH-Cys(Bzl)-N2H 2 -Z-hidrokloridot [Hegedűs, Helv. Chim. Acta, 31, 737 (1948)] 300 ml frissen desztillált dimetilformamidban oldunk, 12,2 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-;hr-OH vegyületet adunk hozzá és szobahőmérsékleten oldódásig keverjük. Ezután az oldatot 0°-ra hűtjük, 3,28 ml trietilamin és 4,88 g N-hidroxiszukcinimid 100 ml dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá, ismét —22°-ra hűtjük és 4,36 g diciklohexilkarbodiimid 30 ml dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá. Egy órán át —22°-on keverjük, majd a belső hőmérsékletet lassan emelkedni hagyjuk és még 3 napig szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált diciklohexilkarbamidot leszűrjük és a szűrletet nagy vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot etílacetát és 5%-os citromsavoldat elegyével elkeverjük, a csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk, vákuumban szárítjuk, száraz éterrel keverjük, szűrjük és nagy vákuumban szárítjuk. Op.: 173—178°. [ot]D = —25,5° (c = 2,0, dimetilformamidban); R^ = 0,21 (szilikagélen). 10. H-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N2H 2 -Z-trifluoracetát 13 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N 2H 2 -Z vegyületet 130 ml 90%-os trifluoracetátoldatban oldunk és az oldatot 2 órán át 22°-on állni hagyjuk. Ezután bepároljuk, a maradékot háromszor éterrel keverjük és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Op. 159—161°. Rf6 = 0,63 (szilikagélen). 11. BOC-Cys(Bzl)-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N2H 2 -Z 6,69 g BOC-Cys(Bzl)-OSU és 12,2 g H-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-N2 H 2 -Z-trifluoracetát vegyületeket 100 ml dimetilformamidban oldunk. 150 mmól trietilamin 100 ml dimetilformamidos oldatából annyit csepegtetünk hozzá, hogy a reakcióelegy pH-ja nedves indikátorpapírral mérve 6,4 legyen. Az oldatot 3 napig szobahőmérsékleten keverjük, majd nagy vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot kétszer 300 ml etilacetáttal, majd háromszor 150 ml etilacetát és 30 ml 5%-os citromsavoldat elegyével keverjük el, leszűrjük, vákuumban szárítjuk és dimetilformamid-etilacetát elegyből átkristályosítjuk. Op.: 191—193°; [a]D = —31,5° (c = 2,0, dimetilformamidban); Rf8 = 0,35 (szilikagélen). 13. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NH-NH2 1,0 g BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NH-NH2 vegyületet 100 ml dimetilformamidban és 500 ml ,1,23 mmól sósavat tartalmazó vízben ol-10 dunk. 3,7 ml 0,43 n káliumhidroxidoldattal a pH érték állandó tartása mellett, 90 perc alatt, keverés közben egyidejűleg 247 ml 0,01 mólos káliumferricianidoldatot és 4,9 ml 0,43 n káliumhidroxidoldatot csepegtetünk hozzá. Ezután az oldatot még 90 percig 15 szobahőmérsékleten keverjük, majd a pH-ját 0,7 -m jégecettel 4,0-re állítjuk. Az oldatot 50 ml acetátciklusú Dowex-2-X8, majd 13 ml H+ -cilusos Dowex 50W-X8 ioncserélő gyantával keverjük, majd szűrjük és szárazra pároljuk. A maradékot 50%-os terc-20 butanolban oldjuk, liofilizáljuk és nagy vákuumban szárítjuk. A termék kb. 15% káliumacetátot tartalmaz. Szilikagéles kromatográfiás vizsgálat során egységes: Rf - = 0,63, F f6 = 0,70, R f7 = 0,75. 25 14. H-Leu-Gly-OEt-hidroklorid 14 g Z-Leu-Gly-OEt vegyületet [J.R. Vaughan és R. L. Osato, J. Am. Chem. Soc. 73, 5553 (1951)] 150 ml abszolút etanolban oldunk, 11,5 ml 6,9 n etanolos sósavoldatot adunk hozzá és 2,8 g pallá-30 dium-szén (10%-os) katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. 1 óra múlva a katalizátort leszívatjuk és az oldatot vákuumban 40°-os fürdőn bepároljuk. A maradék olaj és közvetlenül felhasználható. RfX = = 0,50 (szilikagélen). 35 15. BOC-Met-Leu-Gly-OEt 10,5 g BOC-Met-NH-NH2 100 ml dimetilformamidos oldatához 0°-on 14,8 ml tetrahidrofurános sósa voldatot (5,39 n; 80 mmól), majd —20°-on 5,4 ml 40 izo-amilnitritet adunk, 5 percig —20°-on tartjuk, majd 10,1 g H-Leu-Gly-EOt-hidroklorid és 16,9 ml trietilamin 100 ml dimetilformamidos, előre lehűtött oldatát adjuk hozzá. Ezután leszűrjük a kivált trietilamin-hidrokloridtól, és a szűrletet nagy vá-45 kuumban szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az oldatot egymás után háromszor híg citromsavoldattal, háromszor híg nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk. A szárítás és az oldat bepárlása után keletkezett nyers terméket 50 etilacetát-hexán elegyből átkristályosítjuk? Op.: 118—119°; [ot]D = —30° (c = 2,0, dimetilformamidban); Rft = 0,72 (szilikagélen). 13. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NH-NH2 1,0 g BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-NH-NH2 vegyületet 100 ml dimetilformamidban és 500 ml ,1,23 mmól sósavat tartalmazó vízben ol-10 dunk. 3,7 ml 0,43 n káliumhidroxidoldattal a pH érték állandó tartása mellett, 90 perc alatt, keverés közben egyidejűleg 247 ml 0,01 mólos káliumferricianidoldatot és 4,9 ml 0,43 n káliumhidroxidoldatot csepegtetünk hozzá. Ezután az oldatot még 90 percig 15 szobahőmérsékleten keverjük, majd a pH-ját 0,7 -m jégecettel 4,0-re állítjuk. Az oldatot 50 ml acetátciklusú Dowex-2-X8, majd 13 ml H+ -cilusos Dowex 50W-X8 ioncserélő gyantával keverjük, majd szűrjük és szárazra pároljuk. A maradékot 50%-os terc-20 butanolban oldjuk, liofilizáljuk és nagy vákuumban szárítjuk. A termék kb. 15% káliumacetátot tartalmaz. Szilikagéles kromatográfiás vizsgálat során egységes: Rf - = 0,63, F f6 = 0,70, R f7 = 0,75. 25 14. H-Leu-Gly-OEt-hidroklorid 14 g Z-Leu-Gly-OEt vegyületet [J.R. Vaughan és R. L. Osato, J. Am. Chem. Soc. 73, 5553 (1951)] 150 ml abszolút etanolban oldunk, 11,5 ml 6,9 n etanolos sósavoldatot adunk hozzá és 2,8 g pallá-30 dium-szén (10%-os) katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. 1 óra múlva a katalizátort leszívatjuk és az oldatot vákuumban 40°-os fürdőn bepároljuk. A maradék olaj és közvetlenül felhasználható. RfX = = 0,50 (szilikagélen). 35 15. BOC-Met-Leu-Gly-OEt 10,5 g BOC-Met-NH-NH2 100 ml dimetilformamidos oldatához 0°-on 14,8 ml tetrahidrofurános sósa voldatot (5,39 n; 80 mmól), majd —20°-on 5,4 ml 40 izo-amilnitritet adunk, 5 percig —20°-on tartjuk, majd 10,1 g H-Leu-Gly-EOt-hidroklorid és 16,9 ml trietilamin 100 ml dimetilformamidos, előre lehűtött oldatát adjuk hozzá. Ezután leszűrjük a kivált trietilamin-hidrokloridtól, és a szűrletet nagy vá-45 kuumban szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az oldatot egymás után háromszor híg citromsavoldattal, háromszor híg nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk. A szárítás és az oldat bepárlása után keletkezett nyers terméket 50 etilacetát-hexán elegyből átkristályosítjuk? Op.: 118—119°; [ot]D = —30° (c = 2,0, dimetilformamidban); Rfl = 0,72 (szilikagélen). 16. BOC-Met-Leu-Gly-OH 55 9,98 g BOC-Met-Leu-Gly-OEt vegyületet 300 ml metanolban oldunk. 45 perc alatt szobahőmérsékleten 57 ml 0,59 n nátriumhidroxidoldatot csepegtetünk hozzá és még egy óráig keverjük. Ezután 0,68 n sósavval a pH-értéket 7-re állítjuk be és az 60 oldatot szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban és vízben oldjuk és a pH-értéket 0,68 n sósavval 2-re állítjuk. A vizes fázist etilacetáttal kirázzuk. Az egyesített etilacetátos fázisokat nátriumkloridoldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A mara-65 dékot etilacetát-hexán elegyből átkristályosítjuk. 40
