167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására

Í67238 77 78 —2,6 cm (1,9 pH, 90 perc, 17 V/cm) és a Cys1, Pro

32

-diacetil-kalcitonin M-é ugyanezen körülmények között —1,3 cm (a kalcitonin M-é —3,7 cm). pH 8 értéken a Pro32

-acetil-kalcitonin M 90 perc alatt, 17 V/cm feszültségnél + 0,6 cm-t mozdul el, a Cys1

-acetil-kalcitonin M (valamint a kalcitonin M) a startponton marad. 8. példa Az 1. példában védett alakban leírt BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-OH kiindulási anyagot a következőképpen is előállíthatjuk: 1. BOC-Ser-Thr-OBzl 73,8 g BOC-Ser-OH, diciklohexilammóniumsó 500 ml metilénkloridos oldatához 47,0 g H-Thr-OBzl-hidroklorid 300 ml metilénkloridos oldatát adjuk, 10 percig szobahőmérsékleten keverjük és utána —5°-ra hűtjük. Ezen a hőmérsékleten 40,1 g diciklohexilkarbodiimid 90 ml metilénkloridos oldatát csepegtetjük hozzá. 3 órán át —5°-on keverjük, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A diciklohexilkarbamid leszűrése után az oldatot háromszor 0,1 n sósavval, kétszer 20%-os nátriumkloridoldattal, egyszer 10%-os nátriumhidrogénkarbonátoldattal és kétszer nátriumkloridoldattal kirázzuk és nátriumszulfát felett szárítjuk. Szárazra párolás után a maradékot etilacetát-hexán elegyből kikristályosítva tisztítjuk. Op.: 110—111°; [<x]D

= —8,5° (c = 2,0, dimetilformamidban) ; Rf2

= 0,33 (szilikagélen). 2. H-Ser-Thr-OBzl-trifluoracetát 65,7 g BOC-Ser-Thr-OBzl vegyületet 100 ml 90%-os trifluoracetátoldatban oldunk és az oldatot egy órán át 20°-on tartjuk. Ezután keverés közben 1000 ml száraz éterhez csepegtetjük és egy éjszakán át —10°-on állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot leszűrjük, háromszor száraz éterrel mossuk és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk; op.: 128—129°; Rf7

=0,65, R

f4

= 0,50 (szilikagélen). 3. BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl 52,5 g H-Ser-Thr-OBzl-trifluoracetátot 145 ml diacetilformamidban oldunk és 0°-on 48,0 g BOC-Leu-OBP oldatot adunk hozzá. Ezután 21 ml trietilanynt és 0, 75 ml jégecetet adunk hozzá. A reakcióelegyet 3 órán át 0°-on, és egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. 2,1 liter etilacetát hozzáadása után az oldatot kétszer vízzel, kétszer 0,1 n sósavval, kétszer 10%-os nátriumkloridoldattal, nyolcszor 20%-os káliumkarbonátoldattal, kétszer 10%-os és egyszer 30%-os nátriumkloridoldattal kirázzuk. Nátriumszulfát felett történő szárítás után az oldatot kb 1,4 literrel pároljuk be. Egy éjszakán át hűtőszekrényben tartva kikristályosodik a védett tripeptid. Op.: 114—116°. [a]D

= —14° (c = 2,0 dimetilformamidban); Rf2

= 0,25 (szilikagélen). 4. H-Leu-Ser-Thr-OBzl-trifluoracetát 46,1 g BOC-Leu-Ser-Thr-OBzl vegyületet 92,5 ml 90%-os trifluorecetsavoldatban oldunk és 1 órán át 20°-on tartjuk. Ezután keverés közben 925 ml száraz étert adunk hozzá, egy óráig 0°-on keverjük és egy éjszakán át —10°-on állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot leszűrjük, háromszor száraz éterrel mossuk és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Op.: 168—171°; Rf7

= 0,80 (szilikagélen). 5 5. BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl 20,8 g BOC-Asn-OH vegyületet 208 ml acetonitrilben szuszpendálunk, 22,7 g Woodward-reagens K-t adunk hozzá és 30 percig 20°-on keverjük. Ezután 10 keverés közben 12,6 ml trietilamint csepegtetünk hozzá, miközben a belső hőmérsékletet nem engedjük 32° fölé emelkedni, 20°-ra hűtjük és ezen a hőmérsékleten még 50 percig keverjük. A teljesen átlátszó oldatot 0°-ra hűtjük és 39,1 g H-Leu-Ser-Thr-15 -OBzl-trifluoracetát és 10,5 ml trietilamin 257 ml dimetilformamidos, szintén —10°-ra hűtött oldatát adjuk hozzá. A lassan megdermedő oldatot egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, —10°-ra hűtjük és még két órán át —10°-on keverjük. Ez-20 után a kristályos csapadékot leszívatjuk és a tetrapeptidszármazékot egyszer hideg acetonitrillel, egyszer etilacetáttal és háromszor vízzel mossuk, míg kloridmentes lesz. A keletkezett terméket 370 ml dimetilformamidból, 3,7 ml jégecetből és 25 370 ml acetonitrilből kikristályosítjuk. Op.: 225— —226°. [o]D

= —36° (c = 2,0, dimetilformamidban); Rf6

= 0,85 (szilikagélen). 6. H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl-trifluoracetát 30 32 g BOC-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl vegyületet 192 ml 90%-os trifluorecetsavoldatban oldunk és 45 percig 20°-on tartjuk. Ezután az oldatot kb. 40 ml-re pároljuk be, keverés közben 400 ml étert adunk hozzá és 20 percig 35°-on keverés és vissza-35 folyatás közben forraljuk. Ezután a kristályszuszpenziót —10°-ra hűtjük és egy éjszakán át ezen a hőmérsékleten hagyjuk állni. A csapadékot leszűrjük, háromszor éterrel mossuk és vákuumban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Op.: 125—127°; Rf4

= 0,33 40 (szilikagélen). 7. BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl 26,3 g H-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl;trifluoracetátot 100 ml dimetilformamidban oldunk, 0°-ra hűtjük, 45 egymás után 7,5 ml trietilamint, 0,54 ml jégecetet és 14,4 g BOC-Gly-ONP 100 ml dimetilformamidos oldatát adjuk hozzá. Szobahőmérsékleten keverjük, míg az elegy megdermed, majd két napig állni hagyjuk. Keverés közben 300 ml jégecetet adunk hozzá 50 és egy éjszakán át —10°-on állni hagyjuk. A csapadékot leszűrjük, kétszer etilacetáttal és kétszer éterrel mossuk, félóráig 200 ml vízzel keverjük, leszűrjük, vízzel mossuk és vákuumban szárítjuk. Op.: 227—228°. [a]D

= —23° (c = 2,0, dimetil-55 formamidban); Rf9

= 0,50 (szilikagélen). 8. BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OH 17,0 g BOC-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-OBzl vegyületet 340 ml dimetilformamidban melegítés közben 60 oldunk. Ezután szobahőmérsékletre hűtjük és 3,4 g 10%-os palládium-szén-katalizátort hozzáadva hidrogénezzük. A redukció 4 óra múlva befejeződik. A katalizátort leszűrjük és az oldatot nagy vákuumban bepároljuk. Éterrel háromszor eldörzsölve 65 vékonyrétegkromatográfiásan egységes pentapeptid 39