167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
167238 53 54 54. H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 1,1 g Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH8 vegyületet 50 ml dimetilformamidban oldunk és az oldatot 0,3 g (10%-os) palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel befejezte után a katalizátort leszívatjuk, az oldatot bepároljuk és a maradékot nagy vákuumban 35° fürdőhőmérsékleten szárítjuk. így a H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 tetrapeptidet színtelen anyagként kapjuk. Rf-érték = 0,20 (szilikagéles lemezen, kloroform-metanol 1:1 rendszerben). 55. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 800 mg Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-Hís-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH, 510 mg H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületeket és 120 mg N-hidrooxiszukcinimidet keverés közben 45°-on 9 ml dimetilformamidban oldunk és 120 mg diciklohexükarbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet 45°-on összesen 12 órán át keverjük, miközben 3 és 7 óra után 20—20 mg diciklohexilkarbodiimidet és 20— —20 mg N-hidroxiszukcinimidet adunk hozzá. Ezután 200 ml éterbe öntjük és a finom csapadékot leszívatjuk. Tisztítás céljából a terméket ellenáramú megoszlatásnak vetjük alá, metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid (1:3:5:6, a puffer a 18. pontban leírt) rendszerben. 56. H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu) -Pheln-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro--G7-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 227 mg, 55. pontban előállított, védett dokozapeptidamidot 10 ml 90%-os ecetsavban oldunk és az oldatot 100 mg 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében, intenzív keverés közben hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel megszűnése után a katalizátort leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot vízzel telített n-butanolban oldjuk és háromszor kis mennyiségű 5%-os nátriumkarbonátoldattal és kétszer vízzel kirázzuk. Ezután a butanolos oldatot minden előző szárítás nélkül nagy vákuumban, 35° fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk és a maradékot nagy vákuumban szárítjuk, így 185 mg, színtelen gyanta alakú dekarbobenzoxilezett dokozapeptidet kapunk. 57. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)Cys-Met-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 181 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu) -Cys-Met-Leu-Gly-OH, 288 mg H-Thr(tBu)-Tyr (tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC) -Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületeket és 23 mg N-hidroxiszukcinimidet melegítés közben 2 ml abszolút dimetilformamidban oldunk és szobahőmérsékletre hűtés után 31 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. A lombikba ezután nitrogéngázt vezetünk, lezárjuk és 15 percig 45°-on állni hagyjuk. A keletkezett kristályos diciklohexilkarbamidot leszűrjük, kétszer 0,5 ml dimetilformamiddal mossuk, a szűrletet nagy vákuumban térfogatának felére szűkítjük, és a nyers terméket 20 ml benzol és 120 ml 5 petroléter hozzáadásával kicsapjuk. Tisztítás céljából a terméket még egyszer metanol-benzol-hexán elegyből kicsapjuk, leszűrjük és 45°-on súlyállandóságig szárítjuk. így a védett dotriakontapeptidamidot amorf porként kapjuk, amely vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során egy fő foltot és különböző mellékfoltokat ad. Ez ebben az állapotban felhasználható a védőcsoportok lehasításához. Kitermelés: 65%. 2. példa H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2-acetát (kalcitonin M acetát) 23 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)--Cys-Met-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe^His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet 0°-on 0,6 ml tömény sósavval összeöntünk, az edénybe nitrogéngázt vezetünk, lezárjuk és 10 percig 0°-on keverjük. Ezután kb. —60°-ra hűtjük, nagy vákuuteiban evakuáljuk és az oldatot, a hőmérsékletet lassan 0°-ig emelve, sziruppá töményítjük. 0,4 ml víz hozzáadása után liofilizáljuk, a maradékot 0,2 ml 0,1 n ecetsavoldatban oldjuk és az acetáttá átalakításhoz egy 0,1 n ecetsavval egyensúlyba hozott gyengén bázikus ioncserélő gyanta (pl. Merck Nr. II) ozlopon (0=6 mm, 1 = 100 mm) szűrjük. Az eluátumot 0,5 ml térfogatra koncentráljuk, liofilizáljuk, nagy vákuumban 40°-on utánszárítjuk, majd nyitott edényben tartva légszárazságig hozzuk egyensúlyba, így kalcitonin M acetátot kapunk, vízben oldódó, fehér por alakban. Kitermelés: 98%. A kiindulási anyagként alkalmazott védett dotriakontapeptidamidot a következőképpen állítjuk elő: 1. H-Gly-Asn-Leu-OMe 2,0 g Z-Gly-Asn-Leu-OMe (1. példa 3. pont) (op.: 158—159°, metanol-víz elegyből átkristályosítva) vegyületet melegítés közben 20 ml metanolban oldunk és 200 mg 10%-os palládium-szén-katalizátorral a hidrogénfelvétel végéig hidrogénezünk. A katalizátort leszűrjük és a szűrletet 40° fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk, mikoris a tripeptidmetilészter azonnal kristályos, tiszta alakban (1,34 g, op.: 138—139°) keletkezik. Szükség esetén metanol-petroléter-etilacetát elegyből átkristályosítható. Rf52 = 0,22 (szilikagélen). 2. BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-OMe 5,7 g H-Gly-Asn-Leu-OMe, 9,2 g BOC-Cys(TRI)-OH vegyületeketés 4,16 g N-hidroxiszukcinimidet 200 ml dimetilformamidban oldunk, 0°-ra hűtjük és keverés közben 5,57 g szilárd diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Még egy óráig 0°-on keverjük, egy éjszakán át kb. 20°-on állni hagyjuk, majd nagy vákuumban kb. 100 ml-re pároljuk be, és a kivált diciklohexilkarbamidot leszűrjük. A szűrletet ezután 15 20 24 30 35 40 45 50 55 60 27
