167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
48 27. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 2,85 g Z-Thr(tBu)-OH-diciHohexilammóniumsóból etilacetátos közegben a 23. példában leírtak szerint citromsavval felszabadítjuk a savat és a keletkezett Z-Thr(tBu)-OH olajat 3,33 g H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 80 ml acetonitriles oldatával keverjük szobahőmérsékleten. Ezután 1,20 g szilárd diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá és 23 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexilkarbamid leszűrése után, melyet 3x7 ml acetonitrillel mosunk, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a maradékot háromszor etilacetát-alkohol elegyből petroléterrel kicsapjuk. 28. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-NH-NH2 1,3 g Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet 30 ml metanolban oldunk és 0°-on 6 ml hidrazinhidratot adunk hozzá. Három napig hűtőszekrényben tartjuk, mialatt kocsonyás csapadék keletkezik. Ezt éter hozzáadásával megszilárdítjuk, szűrjük, és a maradékot etanol-éter elegyből átkristályosítjuk. 29. Z-Lys(BOC)-Phe-OMe 25,0 g Z-Lys(BOC)-ONP vegyületet és 10,7 g H-Phe-OMe-hidrokloridot 70 ml dimetilformamidban oldunk, keverés közben szobahőmérsékletén 6,9 ml trietilamint adunk hozzá és még 18 óráig keverjük. Etilacetátos hígítás után káliumkarbonátoldattal nitrofenol-menetesre mossuk, 0,1 mólos citromsavoldattal és vízzel kirázzuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. Etilacetát-hexán elegyből a védett dipeptid 78—80° olvadásponttal kristályosodik ki. Rf = 0,45, szilikagéles vékonyrétegkromatogramon, kloroform-aceton (8:2) rendszerben. 30. Z-Lys(BOC)-Phe-NH-NH2 27 g fenti dipeptidmetilésztert 135 ml meleg metanolban oldunk, szobahőmérsékleten 25 ml hidrazinhidratot adunk hozzá és 16 órán át állni hagyjuk. A kristályos elegyhez 135 ml vizet adunk, leszívatjuk és vízzel jól kimossuk. Op.: 173—174°, metanolvíz elegyből átkristályosítva. Rf = 0,3 szilikagéles vékonyrétegkromatogramon, kloroform-metanol (95:5) elegyben. 31. Z-Lys(BOC)-Phe-His-OMe 5,4 g Z-Lys(BOC)-Phe-NH-NH2 40 ml dimetilformamidos oldatát —16°-on 6,8 ml 3,66 n dioxános sósavoldattal, majd 1,5 ml terc-butilnitrittel elegyítjük. 10 percig —10 és —15° közötti hőmérsékleten tartjuk, majd 3,5 ml trietilamint adunk hozzá. 3,64 g szilárd H-His-OMe-dihidrokloridot adunk hozzá, majd ehhez 4,2 ml trietilamint csepegtetünk. Egy óra alatt hagyjuk 0°-ra felmelegedni, miközben összesen 0,8 ml trietilaminnal a pH-értéket kb. 7-re állítjuk be. Egy éjszakán át 0°-on történő keverés után a reakcióelegyet 250 ml vízbe öntjük és a szemcsés terméket vízzel eldörzsölve porítjuk. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramban, kloroform-metanol (9:1) rendszerben az Rr érték 0,4. Op.: 136— —137° (etilacetátból kikristályosítva). 47 32. H-Lys(BOC)-Phe-His-OMe 6,8 g Z-Lys(BOC)-Phe-His-OMe 140 ml metanolos oldatát 1 g palládium-szén (10%-os) katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befe-5 jezés után a katalizátort leszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot azonnal tovább feldolgozzuk. 33. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-OMe 10 A 32. példában nyert tripeptidészter 5,4 g-ját és 4,5 g Z-Asn-ONP vegyületet 20 ml dimetilformamidban 20 órán át szobahőmérsékleten keverünk. Éterhexán-elegy hozzáadásakor a peptidszármazék kicsapódik, ezt leszűrjük és éterrel nitrofenolmentesre 15 mossuk. A tisztítást dimetilformamid-éter elegyből kicsapva végezzük. A termék a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint egységes. 34. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-NH-NH2 20 3,97 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-OMe vegyületet 20 ml forrásban levő metanolban oldunk. A még kb. 30°-os oldathoz 2,5 ml hidrazinhidratot adunk és 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Víz hozzáadására a peptidhidrazid kicsapódik, me-25 lyet leszűrünk és vízzel hidrazinmentesre mosunk. A termékek dimetilformamid-víz elegyből kicsapjuk. 35. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH 30 4 g Z-Phe-Pro-OH vegyületet [Neumann, I. Biol. Chem. 193, 97 (1951)] metanol-víz (4:1) elegyben oldunk és 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel megszűnte után a katalizátort leszívatjuk, a szűrletet 35 szárazra pároljuk és a maradékot (H-Phe-Pro-OH) szárítjuk. Ehhez 1,1 g N-metilmorfolint és annyi vizet adunk, hogy a termék teljesen oldatba menjen. Az oldatot dimetilformamiddal addig hígítjuk, míg az oldat tiszta marad, majd —5°-ra hűtjük. 40 Ekkor adjuk az oldathoz a Z-Thr-(tBu)-OH vegyes anhidridjét, melyet a következőképpen állítunk elő: 3,6 g Z-Thr(tBu)-OH vegyületet 40 ml abszolút tetrahidrofuránban oldunk, 1,8 ml abszolút trietilamint adunk hozzá és a —10°-ra lehűtött oldathoz 45 1,7 g klórhangyasav-izobutilésztert adunk. 5 percig —10°-on tartás után a kivált trietilaminhidroklorid ellenére az egész reakcióelegyet hozzáadjuk a fenti dipeptidoldathoz. Az elegyet 1 órán át —5°on és 18 órán át 5°-on tartjuk. Ezután az oldhatat-50 lan anyagokat leszűrjük, a szűrletet a tetrahidrofurántól vákuumban, a dimetilformamidtól nagy vákuumban szabadítjuk meg és a maradékhoz nátriumhidrogénkarbonátoldatot adunk. Az oldhatatlan részeket éteres mosással eltávolítjuk, a vizes 55 fázisra etilacetátot rétegezünk rá és megsavanyítjuk. A tripeptidszármazékot etilacetáttal felvesszük, és az etilacetátos oldatot vízzel semlegesre mossuk. Nátriumszulfát felett szárítjuk és bepárolva a Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH vegyületet színtelen gyan-60 tás termékként kapjuk. Tisztítás céljából benzolpetroléter elegyből többször kicsapjuk. 36. Z-Ile-Gly-OMe 2,23 g Z-De-OH-diciklohexilammóniumsót etil-65 acetátban szuszpendálunk és 0,2 mólos citromsav-24
