167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására

167238 49 50 oldattal megsavanyítjuk. A keletkezett etilacetátos oldatot semlegesre mossuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradókot 15 ml acetonitrilben oldjuk, az oldathoz 750 mg H-Gly-OMe-hidrokloridot adunk és 0°-on keverés közben 0,84 ml trietilamint. 10 pere múlva 1,24 g diciklohexilkarbodiimiddel egyesítjük és egy éjszakán át 0°-on keverjük. A csapadékot leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot 30 ml etilacetátban felvesszük és szűrjük. Az etilacetátos oldatot 0,2 mólos citromsavoldattal és telített nátriumhidrogénkarbonátoldattal mossuk, szárítjuk és vákuumban kb. 10 ml térfogatra pároljuk be. 25 ml hexán hozzáadása után a védett peptid kikristályosodik. Op.: 120—122°. Rf

= 0,53, szilikagéles vékonyrétegkromatogramon, kloroform-metanol (95:5) rendszerben. 37. H-Ile-Gly-OMe-hidroklorid 3,36 g Z-Ile-Gly-OMe vegyületet 100 ml metaolban és 10 ml 1 n sósavban oldunk és 0,5 g 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük, és az oldószert teljesen lepároljuk. A keletkezett hab a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint egységes, Rf = 0,26 kloroform-metanol (95:5) rendszerben. 38. Z-Ala-Ile-Gly-OMe 2,39 g fenti dipeptidészter-hidroklorid és 3,78 g Z-Ala-ONP 40 ml dimetilformamidos oldatához keverés közben 1,4 ml trietilamint adunk és a keletkezett szuszpenziót egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Etilacetátos hígítás után híg káliumkarbonátoldattal nitrofenolmentesre mossuk, majd még 0,1 mólos citromsavoldattal és vízzel mossuk. A tripeptidszármazék egy része a kirázás során oldhatatlan marad, ezt leszűrjük. Az etilacetátos oldatot szárítás után szárazra pároljuk. A maradék szintén a tiszta termék. Op.: 190—191°. Rf

= 0,5, szilikagéles vékonyrétegkromatogram- ' ban, kloroform-metanol (95:5) elegyet alkalmazva. 39. H-Ala-Ile-Gly-OMe 2,0 g Z-Ala-Ile-Gly-OMe vegyületet 40 ml metanolban enyhe melegítés közben oldunk és 300 mg 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejeztével a katalizátort leszűrjük és a szűrletet teljesen szárazra pároljuk. A vékonyrétegkromatográfiásan egységes maradókot azonnal továbbalakítjuk. 40. Z-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 1,36 g fenti tripeptidésztert és 2,6 g Z-Thr(tBu)-ONP vegyületet 3 ml dimetilformamidban 20 órán át szobahőmérsékleten keverünk. A tetrapeptidszármazékot éterrel kicsapjuk, leszűrjük és éterrel nitrofenolmentesre mossuk. A terméket dimetilformamid-éter elegyből kicsapva tisztítjuk. 41. H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 5,66 g fenti karbobenzoxivegyületet 50 ml dimetilformamidban 1 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátort 2 g Norit rétegen leszűrjük és a dimetilformamidot nagy vákuumban 40°-on teljesen bepároljuk. Az amorf terméket nyersen dolgozzuk fel a továbbiakban. 42. H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 5 4,3 g tetrapeptidmetilésztert 43 ml metanolban enyhe melegítés közben oldunk. 20°-ra hűtjük és 12 ml 1 n nátriumhidroxidoldatot, majd 5, 10 és 15 perc múlva 5—5 ml vizet adunk hozzá. 1 óra múlva szobahőmérséketen 12 ml 1 n sósavval ele-10 gyítjük, a metanolt vákuumban eltávolítjuk és az oldatot n-butanollal extraháljuk. A butanolos oldatot vízzel kloridmentesre mossuk, majd szárítás nélkül vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot minden további tisztítás nélkül használjuk fel a kö-15 vetkező lépésben. 43. Z-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH A fent előállított tetrapeptidszármazék 4,2 g-já-20 nak, 4,8 g Z-Gly-ONP vegyületnek és 1,35 ml trietilaminnak 30 ml dimetilformamidos oldatát 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Éter hozzáadásakor a termék kicsapódik, majd ezt leszűrjük és éterrel nitrofenol-mentesre mossuk. Vízzel telített n-25 -butanolban oldjuk és 0°-on 1 n sósavval kirázzuk, majd vízzel kloridmentesre mossuk és szárítás nélkül 40°-on vákuumban szárazra pároljuk. Dimetilformamid-éter elegyből ismételten kicsapva a terméket tisztán kapjuk. Nagy vákuumban 40°-on 30 foszforpentoxid felett szárítjuk és potenciometrikusan 0,1 n, 80%-os metanolos nátriumhidroxidoldattal titrálva 693 egyenértéksúlyt kapunk, a számított 680. §5 44. H-Gly-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-hidroklorid 3,40 g Z-Gly-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH vegyületet 70 ml meleg dimetilformamidban oldunk. Lehűtés után szobahőmérsékleten 5 ml 1 n sósavat és 500 mg 10%-os palládium-szén-katalizátort adunk 40 hozzá és hidrogénezzük. A hidrogénezés befejeztével a katalizátort 1 g Norit-on leszívatjuk és a szűrletet 40°-on nagy vákuumban kb. 10 ml-re pároljuk be. Az oldatot 100 ml éterbe csepegtetjük, a kivált anyagot leszűrjük és éterrel mossuk. A nagy vá-45 kuumban szobahőmérsékleten szárított termék 0,1 n 80%-os metanolos nátriumhidroxidoldattal potenciometrikusan titrálva 91%-os tartalmat mutat. 45. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-50 -Gly-OH 2,8 g Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH vegyületet és 0,77 ml abszolút trietilamint 30 ml száraz tetrahidrofuránban oldunk és a —10°-ra lehűtött oldatot cseppenként 700 mg klórhangyasav-izobutilészter-55 rel egyesítjük, vigyázva arra, hogy a hőmérséklet ne emelkedjen —5° fölé. Ezután 10 percig —10°-on tartjuk, majd 2,5 g H-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-hidroklorid 65 ml dimetilformamid-víz (9:1) eleggyel készített, —20°-ra lehűtött oldatát adjuk 60 hozzá. Vákuumban, majd nagy vákuumban 40° fürdőhőmérsékleten kb. 15 ml térfogatra pároljuk be, majd 100 ml jéghideg, 2%-os ecetsavat hozzáadva kicsapjuk. Ezt leszívatjuk, jeges vízzel mossuk, szárítjuk és tisztítás céljából metanol-víz elegyből 65 kicsapjuk. Termelés 3,9 g oktapeptidszármazék. 25