167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
í67238 45 46 után vákuumban kb. 10 ml-re pároljuk be és a dekapeptidszármazékot 100 ml jéghideg, 1%-os vizes ecetsavoldattal kiesapjuk. Jeges vízzel eldörzsölve, leszívatva, majd jeges vízzel mosva a terméket exszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A terméket tisztítás céljából ellenáramú megoszlatásnak vetjük alá, metanol-puPer-kloroform-széntetraklorid (10:3:5:4) rendszert alkalmazva. (Puffer: 29 ml jégecet, 19 g ammóniumacetát, vízzel 1 literre töltve.) A tiszta dekapeptidszármazékot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldatot bepároljuk. Az ammóniumacetát eltávolítására a terméket kloroformban oldjuk és az oldatot háromszor híg vizes citromsavoldattal és háromszor vízzel mossuk, majd zárazra pároljuk. s Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás izsgálat szerint Rf100 = 0,45; Rf121 4 — 0,55; Rf70 = v= 0,40^^= 0,35. 19. Z-Asp(OtBu)Phe-OMe 3,0 g H-Phe-OMe-hidrokloridot és 6,17 g Z-Asp (OtBu)-ONP vegyületet 25 ml abszolút N,N-dimetilformamidban tiszta oldattá oldunk és keverés közben 1,93 ml trietilamint adunk hozzá. A sötétsárga szuszpenziót egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd sok etilacetátban felvesszük és háromszor híg vizes citromsavoldattal, ötször híg vizes nátriumkarbonátoldattal, és végül telített vizes nátriumkloridoldattal addig mossuk, míg a mosófolyadék semleges marad. Nátriumszulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk és a keletkezett, éterben és kloroformban oldódó terméket szilikagéles oszlopkromatográfiás eljárással (az anyagot toluol és toluol-éter 4:1 eleggyel eluálva) tisztítjuk; így színtelen, olajos termék keletkezik. Szilikagélen az Rf érték kloroform-metanol (9:1) rendszerben 0,75, kloroform-aceton (1:1) rendszerben 0,67. 20. H-Asp(OtBu)-Ph-OMe-hidroklorid 770 mg Z-Asp(OtBu)-Phe-OMe dipeptidet 200 ml metanolban oldunk és 0,60 ml dioxános sósavoldat (3,0 n 1,8 mmól) és 200 mg 10%-os palládium-czén-katalizátor hozzáadásával hidrogénnel dekarbbobenzoxilezzük. Az igen gyors hidrogénfelvétel befejeztével az elegyet szűrjük, bepároljuk, etilacetátban eltávolítjuk a kevés oldhatatlan szennyezést és éterrel kicsapjuk. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon kloroform-metanol (9:1) rendszerben R = ' 0,62; Rf43( , = = 0,63. 21. Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 550 mg H-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidrokloridot és 574 mg Z-Gln-ONP vegyületet 2,5 ml abszolút N,N-dimetilformamidban oldunk és 0,20 ml trietilaminnal 15 órán át 30—33° fürdőhőmérsékleten keverjük. Ezután sok etilacetátos oldatban a 19. példában leírtak szeint kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. 22. H-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidroklorid 4,4 g Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet 300 ml metanolban, 2,4 ml dioxános sósavoldat (3,0 n, 7,2 mmól) és 900 mg 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénnel szobahőmérsékleten rázókacsában dekarbobenzoxilezünk. A hidrogénfelvétel befejeztével az elegyet leszűrjük, és vákuumban szárazra pároljuk. A sárgás, szilárd maradékot éterrel kétszer eldörzsöljük és minden 5 további tisztítás nélkül használjuk fel a következő lépésben. 23. Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Ome 3,68 g Z-Thr(tBu)-OH-dicikíohexilammóniumsót 10 etilacetátos oldatban háromszor híg vizes citromsavoldattal és háromszor telített vizes nátriumkloridoldattal kirázunk, nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. Az így keletkezett, víztiszta olajat 3,34 g H-Gln-Asp(OtBu)-Éhe-Ome40mlmeti-15 lénkloridos oldatával keverjük. 0,9 ml trietilamint öntünk hozzá és 1,54 g diciklohexilkarbociimid 10 ml metilénkloridos oldatát csepegtetjük hozzá. 10 ml metilénkloriddal utánamossuk és a szuszpenziót szobahőmérsékleten 14 órán át keverjük. Ezután 20 két órán át hűtőszekrényben tartjuk, a szilárd csapadékot leszűrjük, ezt kevés metilénkloriddal mossuk és a szűrletet sok etilacetátos oldat alakban a 19. példában leírtak szerint mossuk. Az amorf bepárlási maradékot éter-hexán (1:1) eleggyel eldörzsöljük 25 és szárítjuk. 24. H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 4,3 g Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet 300 ml metanolban 1 g 10%-os palládium-30 -szén-katalizátorral a szokásos módon hidrogénezünk, majd a hidrogénfelvétel megszűnte után szűrjük és bepároljuk. A bepárlás maradékát, szilárd, színtelen habot minden további tisztítás nélkül használhatjuk fel a következő lépésre. 35 25. Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 3,5 g Z-Tyr(tBu)-OH-diciklohexilammómumsóból a 23. példa szerint etilacetátban citromsavval felszabadítjuk a savat és a keletkezett, tiszta olajat 40 3,29 g H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 80 ml acetonitriles oldatával keverjük. Ehhez 1,31 g szilárd diciklohexilkarbodiimidet adunk és 24 óráig szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a kivált diciklohexilkarbamidot leszűrjük, ezt kevés acetonitrillel 4e mossuk és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot sok kloroformban oldjuk és háromszor híg vizes citromsavoldattal, háromszor vizes nátriumkarbonátoldattal és négyszer telített nátriumkloridoldattal kirázzuk. Nátriumszulfát felett szárítjuk, majd 80 bepároljuk, a maradékot metanol-etilacetát (1:8) elegyben oldjuk és petroléterrel hidegben kicsapjuk. A kicsapást megismételjük. A védett pentapeptid finomszemcsés porként keletkezik. 56 26. H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 4,0 g Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet 100 ml előre hidrogénezett abszolút N,N-dimetilformamidban 1,4 g 10%-os palládium-60 -szén-katalizátor hozzáadása mellett szobahőmérsékleten hidrogénnel dekarbobenzolxilezünk. A hidrogénfelvétel befejezte után 400 ml metanollal hígítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A színtelen, szilárd maradékot minden további tisztítás 95 nélkül használjuk fel a következő lépésben. 23
