167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
43 167238 44 Az oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk, majd bepároljukj és a keletkezett habot 250 ml etilacetétban felvesszük. 6,36 ml (38,6 mmól) trietilamint adunk hozzá, az oldatot —10°-ra hűtjük, és keverésközben 5,13 ml (38,6 mmól) izobutilklórkarbonátot oldunk hozzá. 10 per.cig —10°-on keverjük, majd a —12°ra hűtött, 7,3 g (38,6 mmól) H-Thr(tBu)-OMe 100 ml etilacetátos oldatát csepegtetjük hozzá úgy, hogy a reakció hőmérséklete ne emelkedjék —10° fölé. A hozzáadás befejeztével még egy órán át —10°-on keverjük, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot megszűrjük a kicsapódott trietilamin-hidrokloridtól, és 0°-on háromszor 20 ml 1 n citromsavoldattal és ötször telített nátriumkloridoldattal mossuk, majdszárítjuk, és bepároljuk. Nyers termék (olaj): 22,07 g. Tisztítás céljából 1 g anyagot szilikagéloszlopon (2,5 cm, 30 cm) kromatográfiaiunk. Petroléter-etilacetát eleggyel 110 ml átfutása után 787 mg tiszta terméket eluálunk. Vékonyrétegkromatogramon (szilikagélen) toluol-aceton (7:3) rendszerben Rf = 0,51. 13. DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2 4,253 g (7,4 mmól) DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-OMe vegyület 18 ml metanolos oldatát 5,55 ml (kb. 110 mmól) hidrazinhidráttal elegyítjük, és 10 órán át szobahőmérsékleten és két órán át 40°-on tartjuk. A reakcióelegyet 450 ml etilacetátban felvesszük és négyszer félig telített nátríümkloridoldattal mossuk. Az oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk, majd kb. 15 ml-re bepároljuk és kb. 5 ml petrolétert adunk hozzá. Egy éjszaka alatt 3,17 g hidrazid kristályosodik ki, op.: 132—134°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban toluol-aceton (7:3) rendszer esetén Rf = 0,40. 14a. DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OMe 900 mg DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2 12 ml dimetilformamidos oldatához —20°-on 2,0 ml 2,0 n etilacetátos sósavoldatot, majd 210 mg terc-butilnitritet adunk. 15 perc múlva —10°-on 680 mg H-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OMe acetátjának 9 ml dimetilformamidos, —10°-ra lehűtött oldatát csepegtetjük hozzá, majd ezután még 350 mg N-metilmorfolint is adunk, hozzá. A reakcióhőmérséklet a hozzáadás alatt ne haladja meg a —5°-ot. Ezután egy órán át —5°-on, majd 18 órán át 25°-on keverjük. Ezután vákuumban, majd nagy vákuumban kis térfogatra pároljuk be, majd a nyers terméket jeges víz hozzáadásával kicsapjuk. A terméket alaposan eldörzsöljük, a vizes oldatot leöntjük és az oldhatatlan hexapeptidszármazékot szárítjuk. Tisztítás céljából kétszer metanolból víz hozzáadásával,imajd etilacetátos oldatból petroléter hozzáadásával kicsapjuk, így 480 mg PDC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys (TRI)-Met-Leu-Gly-OMe keletkezik. 14b. DPC-Ser(tBu)Thr(tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH 857 mg DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2 8,0 ml dimetilformamidos oldatához —10°-on 1,87 ml 2,0 n etilacetátos sósavoldatot és 0,19 ml terc-butilnitritet adunk. 15 perc múlva —10°-on nitrogénbevezetés közben 665 mg H-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH és 0,665 ml trietilamin 7 ml dimetilformamidos oldatát csepegtetjük hozzá. Még egy óráig —10°-on keverjük, majd 24 óráig 0°-on állni hagyjuk. A reak-5 cióelegyet nagy vákuumban, 30°-on kb. 3 ml térfogatra pároljuk be, és 50 ml vízzel kicsapva pelyhes termék keletkezik, amelyet leszűrünk, vízzel mosunk és nátriumhidroxid felett nagyvákuumban szárítunk. Benzol-hexán elegyből kicsapva tisztítjuk. 10 Rf = 0,36, kloroform-metanol (7:3) rendszerben. 15. DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH 2,3 g, 14a. példában előállított hexapeptidszár-15 mazékot 100 ml dioxán-víz elegyben (4:1) oldunk, és 5 ml 1 n nátriumhidroxidoldatot adunk hozzá. 90 perc múlva 27°-on a lúgfelesleget kevés szilárd széndioxid hozzáadásával közömbösítjük, az oldatot vákuumban kb. 10 ml-re szűkítjük, és 80 ml jég-20 hideg 2%-os vizes citromsavoldatot adunk hozzá. A kicsapódott hexapeptidszármazékot alaposan eldörzsöljük, leszívatjuk, több részlet jeges vízzel mossuk, és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 25 16. H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH-acetát 870 mg, 15. példában előállított hexapeptidszármazékot 15 ml 80%-os ecetsavoldatban oldunk és az oldatot 6 órán át 30°-on tartjuk. Ezután nagy 30 vákuumban 30°-on szárazra pároljuk, a maradékot 1 órán át 30°-on szárítjuk, maj peroxidmentes étert adunk hozzá és a keletkezett port alaposan eldörzsöljük. Ezután a reakcióelegyet leszívatjuk, sok éterrel utánamossuk, és szárítjuk. 35 17. BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr (tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH 1,0 g BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-NH-NHa vegyületet 20 ml dimetilformamidban oldunk és a 40 —10°-ra lehűtött oldathoz keverés közben 1,5 ml 2,0 n etilacetátos sósavoldatot és 143 mg terc-butilnitritet adunk. 15 percig —10°-on tartjuk, majd további 10 ml, —10°-ra hűtött dimetilformamidot, 1,0 g finom porított H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-45 -Met-Leu-Gly-OH-acetátot és 400 mg N-metilmorfolint adunk hozzá. A reakcióelegyet nitrogénatmoszférában 1 órán át —10°-on és 48 órán át 28°-on keverjük. Ezután nagy vákuumban kb. 6 ml-re pároljuk be és a dekapeptidszármazékot 100 ml jeges 50 víz hozzáadásával kicsapjuk. A keletkezett csapadékot eldörzsöljük, leszívatjuk és vákuumexszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. A termék Rf-értékei szilikagéles vékonyrétegkromatográfiában- Rf kloroform-metanol rendszerben (7:3) = 55 = 0,60. 18. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Met-Leu-Gly-OH 300 mg BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-60 -Thr(tBu)-Cys(TRI)-Met-Leu-Gly-OH vegyületet 100 ml metanolban oldunk és 1 óra alatt 400 mg jód erősen kevert, 120 ml metanolos oldatához csepegtetjük. A hozzáadás befejeztével még 45 percig továbbkeverjük, majd a 0°-ra lehűtött oldatot 1 n 65 vizes nátriumtioszulfátoldattal elszíntelenítjük. Ez-22
