167141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-helyettesített 7-acilamino-CEF-3-EM-4-karbonsav-származékok előállítására

65 167141 66 lepényt etanollal alaposan mossuk, majd a szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük, és vákuumban, szobahőmérsékleten vagy szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékleten bepároljuk. A szilárd maradékot éterrel többször mossuk, majd nitrogénáramban szárítjuk. A termék infravörös és NMR-spektruma alátámasztja a várt szerkezetet. s D) lépés: 7-Hidroximetil-7-amino-cefalosporánsav-benzhidrilészter 3,5 ml éter, 0,5 ml etilacetát, 2 ml víz és 22 mg dikálium-hidrogénfoszfát elegyéhez 100 mg 7-hidroximetil-7-amino-cefalosporánsav-benzhidrilészter-p-toluolszulfonsavas sót adunk, és az elegyet néhány percig erélyesen rázzuk. A két fázist elválasztjuk egymástól, a vizes fázist éterrel extraháljuk, és a szerves oldatokat egyesítjük. A szerves oldatot vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A gumiszerű maradékot kevés kloroformban oldjuk, és az oldatot nagy vákuumban bepároljuk. Ezt a műveletet többször megismételjük. A kapott termék infravörös és NMR-spektruma alátámasztja a várt szerkezetet. E) lépés: 7-(2-tienil-acetoximetil)-7-(4-nitro-benzilidénamino)-cefalosporánsav-benzhidrilészter 90 mg 7-hidroximetil-7-(4-nitro-benzilidinamino)-cefalosporánsav-benzhidrilészter 0,3 ml száraz metilénkloriddal készített oldatához 0C°-on 100 mg piridin 0,5 ml száraz metilénkloriddal készített, 0 C°-os oldatát adjuk. Az elegyhez keverés és hűtés közben, 10 perc alatt 25 mg 2-tienil-acetilklorid 0,25 ml száraz metilénkloriddal készített, hideg oldatát adjuk, és az elegyet 2 órán át 0C°-on tartjuk. A reakcióelegyhez ezután 55 mg dikálium-hidrogénfoszfát 3 ml vízzel készített oldatát adjuk, az elegyet összerázzuk, a szerves fázist elválasztjuk, vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk, és nagy vákuumban bepároljuk. A gumiszerű maradékot kevés kloroformban oldjuk, és az oldatot csökkentett nyomáson ismét bepároljuk. A gumiszerű maradékot preparatív vékonyrétegkromatográfiával tisztítjuk. Adszorbensként lOOOju vastagságú szilikagéllemezt, eluálószerként 5% etilacetátot tartalmazó kloroformot használunk. A terméket fluoreszcens indikátorral, rövid- és hosszú-hullámú ultraibolya fénnyel mutatjuk ki. A terméket tartalmazó foltot elkülönítjük, és a terméket etilacetáttal leoldjuk. A termék infravörös és NMR-spektruma alátámasztja a várt szerkezetet. F) lépés: 7-(2-Tienil-acetoximetil)-7-amino-cefalosporánsav-benzhidrilészter 15,9 mg 2,4-dinitro-fenilhidrazin, 13,5 mg p-toluol-szulfonsav és 2 ml absz. etanol elegyét 30 percig keverjük. Az elegyhez 58 mg 7-(2-tienil-a c e toximetil)-7-(4-nitro-benzilidin-amino)-cefalosporánsav-benzhidrilészter 1,5 ml etanollal és 0,2 ml metilénkloriddal készített oldatát adjuk. Az elegyet 30 percig keverjük, majd szűrjük, és a szűrőlepényt etanollal alaposan mossuk. A szűrletet vákuumban, szobahőmérsékleten vagy szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékleten bepároljuk, és a szilárd maradékot éterrel többször mossuk. A szilárd anyag-5 hoz 28 mg dikálium-hidrogénfoszfát 2 ml vízzel készített oldatát és 4 ml étert adunk, az elegyet összerázzuk, a két fázist elválasztjuk egymástól, és a vizes oldatot éterrel extraháljuk. A szerves oldatokat egyesítjük, vízmentes magnéziumszulfát fölött 10 szárítjuk, majd nagy vákuumban bepároljuk. A terméket preparatív vékonyrétegkromatográfiás úton tisztítjuk, adszorbensként 1000/x vastagságú szilikagél-lemezt, eluálószerként 30% etilacetátot tartalmazó benzolt használunk. A terméket fluoreszcens 15 indikátorral, rövid- és hosszú-hullámú ultraibolya fényben mutatjuk ki. A terméket tartalmazó foltot elkülönítjük, és a terméket etilacetáttal leoldjuk. Á termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján lényegében egységes. Az infravörös és NMR-spektrum 20 alátámasztja a várt szerkezetet. G) lépés: 7-Hidroximetil-7-(2-tienil-acetamido)-cefalosporánsav-25 -benzhidrilészter előállítása I. eljárásváltozat: O -* N acil-vándorlással A 7-(2-tienil-acetoximetil)-7-amino-cefalosporán-30 sav-benzhidrilészterben spontán intramolekuláris 0->N acil-vándorlás megy végbe. Amikor az acil-vándorlás (vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján) megfelelő mértékben végbement, a lényegesen polárosabb 7-hidroximetü-7-(2-tienil-acetami-35 do)-cefalosporánsav-benzhidrilésztert preparatív vékonyrétegkromatográfiás úton, vagy szilikagélen végzett kromatografálással elkülönítjük. A termék vékonyrétegkromatográfiásan egységes, és infravörös és NMR-spektruma alátámasztja a várt szerkezetet. 40 II. eljárásváltozat: Savanhidriddel végzett közvetlen acilezés 45 100 mg 7-hidroximetil-7-amino-cefalosporánsav-benzhidrilészter-p-toluolszulfonsavas só, 43 mg 2-tienil-ecetsavanhidrid, 2 ml víz, 3,5 ml éter, 0,5 ml etilacetát és 30 mg dikálium-hidrogénfoszfát elegyét alaposan összerázzuk. A két fázist elválaszt-50 juk egymástól, és a vizes fázist éterrel extraháljuk. A szerves oldatokat egyesítjük, magnéziumszulfát fölött szárítjuk, és kb. 0,5 ml végtérfogatra bepároljuk. A maradékhoz 0,1 ml piridint adunk, és az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten állni hagy-55 juk. A r^akcióelegyet nagy vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot 5 ml éterben felvesszük, és az ' oldathoz 25 mg dikálium-hidrogénfoszfát 2 ml vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet összerázzuk, a két fázist elválasztjuk egymástól, és a vizes fázist 60 3 ml éterrel extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk, majd nagyvákuumban bepároljuk. A nyers, olajos maradékot kevés kloroformban oldjuk, és az oldatot nagyvákuumban ismét bepároljuk. Ezt a 65 műveletet megismételjük. A kapott maradékot pre-33