166840. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
166840 19 20 móniumhidroxiddal 9,0-re állítjuk be, majd nitrogénáram alatt lassan elpárologtatjuk az acetont. Amikor az aceton elpárolgott, az oldatból kristályos csapadék válik ki. Egy éjszakán át 5 °C hőmérsékleten hagyjuk állni a szuszpenziót, ami idő alatt a kristályosodási folyamat befejeződik. Szűréssel elkülönítjük a terméket és szárítjuk, így 138 mg, 124—125 °C olvadáspontú kristályos A 28695B-ammóniumsót kapunk. Az állatorvosi gyakorlatban tudott dolog, hogy a kezelés szempontjából lényegtelen, hogy az antibiotikumot sóként vagy savként adagoljuk. Az állati szervezetben az antibiotikum gyakran nem olyan kémiai alakban hat, mint amilyenben adagoljuk, így az, hogy az antibiotikumot sav- vagy sóalakban adjuk, a kezelés módjától független, gazdasági, kényelmi és toxicitási szempontok határozzák meg. A találmány szerinti eljárást a bendőben felszabaduló illékony zsírsavak mennyiségi szabályozására kísérletesen vizsgáljuk. A következő kísérletet végezzük el. 11. példa Egy bika bendőjéből műtéti úton a bendőbe bevezetett katéterrel váladékot veszünk. Az állatot nagy darabokból álló, a következő összetételű táplálékkal etetjük: Durva kukoricaszár 69,95% Kukoricatorzsa 10,00% Szójaliszt (50% fehérje) 8, % Lucernaliszt 5 % Melasz 5 % Karbamid 0,6 % Kalciumfoszfát 0,5 % Kalciumkarbonát 0,5 % Kősó 0,3 % A- és D2 -vitamin-premix 0,070/o E-vitamin-premix 0,05% Nyomelem-premix 0,03% A bendőből kifolyó váladékot 4 rétegből álló vászonszűrőn szűrjük és egy edénybe, amelyben csökkentett nyomást biztosítunk, összegyűjtjük. A szűrővásznon maradó darabos anyagot elegendő mennyiségű fiziológiás pufferban szuszpendáljuk (eredeti térfogatára hígítva), és ismét szűrjük. Pufferként az alábbi összetételű oldatot használjuk: Na3 HP0 4 KH2PO4 NaHCOs KCl NaCl MgS04 CaCl2 FeSC-4 • MnSOé ZnS04 CuSC-4 • CoCl2 Desztillált víz 7H2 0 •7H2 0 5H2 0 0,316 g 0,152 g 2,260 g 0,375 g 0,375 g 0,112 g 0,038 g 0,008 g 0,004 g 0,004 g 0,002 g 0,001 g 1 liter 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 [Cheng és munkatársai, J. Dairy Sei. 38, 1225 (1955)]. A két eluátumot összegyűjtjük és választótölcsérben addig hagyjuk állni, míg a szilárd halmazállapotú anyag a felszínen elkülönül. Az átlátszó réteget a fenti puffer-oldattal 1 :1 arányban hígítjuk és pH-ját 7,0-re állítjuk be. 25 ml-es lombikokba egyenként 10 ml hígított bendőváladékot és 40 mg, az előzőekben megadott összetételű tápszert, majd 5 mg szójababfehérjét adunk. A vizsgálandó vegyületet lemérjük és hozzáadjuk a szuszpenzióhoz. A kísérlet során négy-négy azonosan kezelt lombikot használunk egy-egy hatóanyagmennyiség hatásának vizsgálatára. Kontrollként kétszer négy, hatóanyagot nem tartalmazó lombikot használunk. Négy lombikot a kísérleti anyagot tartalmazó lombikokkal együtt 16 órán át 38 °C hőmérsékleten inkubálunk, a másik négy, hatóanyaggal nem kezelt lombik a nulla órás kontroll, ezekhez a kísérlet kezdetén a fermentáció leállítására 2 ml 25%-os metafoszforsavat adunk. A hatóanyagot tartalmazó és a hatóanyagot nem tartalmazó kontroli-lombikokhoz a 16 órás inkubáció végén szintén 2 ml 25%-os metafoszf orsavat adunk. A mintákat ezután ülepedni hagyjuk, a felülúszót az acetát-, propionát- és butirát-tartalom meghatározására gázkromatográfiával analizáljuk. Az illékony zsírsav-analízisnek a hatóanyagot tartalmazó lombikokra és a nem kezelt kontrolilombikokra vonatkozó eredményeiből kivonjuk a nulla órás-kontroli eredményeit. Az eredmények a 16 órás inkubáció alatt keletkezett illékony zsírsavnak összegét jelzik. A lombik eredményeit átlagoljuk. A következőkben a kezelt és nem kezelt kontroli-lombikokban keletkező illékony zsírsavak hányadosát adjuk meg. A közölt vizsgálat adatai világosan mutatják, hogy a találmány szerinti eljárás a tápanyag-hasznosításának javítására megváltoztatja a bendőtartalom kémiai összetételét. Antibiotikum M mi? §8 < 4* •« c 0 s Butirát A 28695A nátrium-25 1,03 1,53 0,48 és káliumsójának 10 0,87 1,58 0,65 keveréke 5 1,07 1,46 0,53 5 0,90 1,90 0,72 1,07 1,30 0,64 0,92 1,59 0,78 0,90 1,34 1,00 0,98 1,10 1,87 0,96 1,23 0,82 0,98 1,41 0,66 0,85 1,32 0,88 0,95 1,38 0,80 10
