166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
166686 63 64 27. Z-Ile-Gly-OMe 2,23 g Z-Ue-OH diciklohexilammóniumsót etilacetátban szuszpendálunk, és 0,2 mólos citromsavoldattal megsavanyítjuk. A keletkezett etilacetátos oldatot semlegesre mossuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot 15 ml acetonitrilben oldjuk, az oldathoz 750 mg H-Gly-OMe hidrokloridot adunk, majd 0°-on keverve 0,84 ml trietilamint, 10 perc múlva 1,24 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá, és egy éjszakán át 0°-on keverjük. A csapadékot leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot 30 ml etilacetátban felvesszük és leszűrjük. Az etilacetátos oldatot 0,2 mólos citromsavoldattal és telített nátriumhidrogénkarbonátoldattal mossuk, szárítjuk és vákuumban kb. 10 ml-re pároljuk be. 25 ml hexánt hozzáadva kikristályosodik a dipeptid. Op.: 120—122°. Rf = 0,53, kloroform-metanol (9 5:5) rendszerben, szilikagéles vékonyrétegen. 28. H-Ile-Gly-OMe. hidroklorid 3,36 g Z-Ile-Gly-OMe vegyületet 100 ml metanolban és 10 ml 1 n sósavban oldunk, és 0,5 g 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátor leszűrése után az oldószert teljesen lepároljuk. A keletkezett hab szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfia szerint egységes; Rf = 0,26, kloroform-metanol (9 5:5) rendszerben. 29. Z-Ala-Ile-Gly-OMe 2,39 g fenti dipeptidészter-hidroklorid és 3,78 g Z-Ala-ONP 40 ml dimetilformamidos oldatához keverés közben 1,4 ml trietilamint adunk és a keletkezett szuszpenziót egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Etilacetátos hígítás után híg káliumkarbonátoldattal nitrofenol-mentesre mossuk, majd még 0,1 mólos citromsavoldattal és vízzel mossuk. A tripeptid-származék egy része a kirázás alatt oldhatatlan marad, ezt leszűrjük. Az etilacetátos oldatot szárítás után teljesen bepároljuk. A maradék ugyancsak a tiszta termék. Op.: 190—191°. Rf = 0,5 kloroform-metanol (95 : 5) rendszerben szilikagél vékonyrétegen. 30. H-Ala-Ile-Gly-OMe 2,0 g Z-Ala-Ue-Gly-OMe vegyületet 40 ml metanolban oldunk enyhe melegítés közben, majd 300 mg 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A vékonyrétegkromatográfiásan egységes maradékot azonnal továbbalakítjuk. 31. Z-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 1,36 g H-Ala-Ile-Gly-OMe vegyületet és 2,5 g Z-Thr(tBu)-OSU vegyületet 3 ml dimetilformamidos oldatban 20 órán át szobahőmérsékleten keverünk. A tetrapeptisszármazékot éterrel kicsapjuk, leszűrjük és éterrel mossuk. Etanolból történő átkristályosítás után az Op. = 229—230°. [a]g* = - 43° (c = 1, metanolban). Rf = 0,55 kloroform-metanol (95 : 5) rendszerben, szilikagélen. 5 32. H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 5,66 g fenti karbobenzoxivegyületet 400 ml meleg 10 metanolban oldunk és 1 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátor leszűrése után a metanolt vákuumban 40°-on lepároljuk. A szilárd maradékot azonnal továbbalakítjuk. Rf = 0,2 kloroform-metanol (95 : 5) rendszerben, szilikagélen. 33. Z-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe 20 4,6 g 32. pontban leírt H-Thr(tBu)-Ala-Ue-Gly-OMe vegyület 30 ml dimetilformamidos oldatához 3,5 g Z-Gln-ONP vegyületet adunk, és szobahőmérsékleten addig keverjük, míg az elegy megszilárdul. Egy éjszakán át történő állás után éterrel hígítjuk, a csapadékot le-25 szűrjük és éterrel nitrofenolmentesre mossuk. A védett pentapeptid szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során kloroform-metanol (95: 5) rendszerben Rf = 0,14 értéket ad. Op.: 250° felett. 34. H-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe. hidroklorid 14,4 g 33. pontban leírt pentapeptidszármazékot 35 800 ml 80%-os metanolban szuszpendálunk, és egy ideig 50°-on melegítjük. A szuszpenziót szobahőmérsékletre hűtjük, 20,8 ml sósavat és 3 g 10%-os palládium-szén katalizátort adunk hozzá, és addig hidrogénezzük, míg a hidrogénfelvétel véget ér, és a kiindulási anyag 40 oldatba ment. A katalizátor leszűrése után a szűrletet vákuumban 40°-on bepároljuk, és a maradékot dimetilformamiddal kétszer bepárolva víztelenítjük. A maradékot további tisztítás nélkül használjuk fel. Rnm = 0,33 szilikagéles lemezen. 35. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ue-Gly-OMe 50 12,0 g 34. pontban leírt pentapeptid-metilészter-hidrokloridot 80 ml dimetilformamidban oldunk. Keverés közben szobahőmérsékleten egymásután 13,3 g Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH vegyületet és 5,75 g N-hidroxi-55 szukcinimidet, majd 0°-on 2,76 ml trietilamint és 6,2 g díciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. 0°-on addig keverjük, míg az elegy besűrűsödik, majd egy éjszakán át 0°-on állni hagyjuk. Nagy vákuumban kb. 50 ml-re sűrítjük be, és a terméket 300 ml éterrel kicsapjuk. 60 Az elválasztott anyagot 0,05 mólos citromsavoldattal és vízzel mossuk, és nagy vákuumban 40°-on szárítjuk. Kb. 1 liter izopropanolból átkristályosítva tisztítjuk. 18,2 g védett oktapeptidszármazékot kapunk. Rfg9 = 0,27, szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás 65 vizsgálatban. 32
