166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
166686 65 66 36. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gm-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 10,9 g 35. pontban leírt oktapeptidmetilésztert 190 ml 90%-os metanolban 70°-on melegítve oldunk. Szobahőmérsékletre hűtjük, és 30 ml 1 n nátriumhidroxidoldatot, majd 10 perc múlva 160 ml vizet csepegtetünk hozzá. Ezután leszűrjük, és a szűrletből 600 ml 0,05 n jéghideg sósavra öntéssel kicsapjuk a terméket. A csapadékot leszűrjük, és vízzel semlegesre mossuk. A vékonyrétegkromatográfiásan (szilikagéles lemezen) egységes terméket (Rfl00 = 0,45) metanol-víz elegyből átkristályosíthatjuk. 37. H-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-IIe-Gly-OH. acetát 3,6 g 36. pontban előállított Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH vegyületet 100 ml 80%os ecetsavban oldunk, és az oldatot 0,5 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel befejeződése után a katalizátort leszívatjuk, és az oldatot szárazra pároljuk. A színtelen gyantaként keletkezett oktapeptidszármazék ecetsavas sóját nagy vákuumban szárítjuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfl00 =0,21. 38. Z-Asn-Lys(BOQ-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 11,25 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-hidrazid (1. 24. pont) 65 ml dimetilformamidos oldatához —20 és — 25° közötti hőmérsékleten 2 perc alatt 8,4 ml 4,2 n dioxános sósavoldatot adunk. Ezután —15 és —20° között 2,1 ml terc-butilnitritet csepegtetünk hozzá, és 15 percig — 15°-on állni hagyjuk. — 20°-ra hűtés után 4,8 ml trietilamint adunk hozzá, majd 9,0 g, a 37. pontban leírt termék 210 ml 90%-os dimetilformamidos oldatát. Erős hűtéssel a belső hőmérsékletet — 15°-on tartjuk. Egy óra alatt 0°-ig melegítjük, mialatt trietilamin alkalmi adagolásával a pH-értéket 7 és 8 között tartjuk. Összesen még 3,5 ml trietilamint adunk hozzá. Egy éjszakán át 0°-on keverjük, majd 3 liter éterbe öntjük, és egyszer vízzel mossuk. A nyers terméket 500 ml meleg metanolban oldjuk, és 1,5 liter 1%-os ecetsavoldatba öntve ismét kicsapjuk. A leszűrt és vízzel kétszer mosott terméket még egyszer ugyanígy kicsapjuk. Rnoo = 0,33 (szilikagéles lemezeken). 39. H-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-GIy-OH. acetát 1,7 g fenti védett dodekapeptidet oldunk 100 ml 80%-os ecetsavban, és 0,5 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében a szokásos módon hidrogénezzük. A katalizátor leszűrése után nagy vákuumban 30°-on erősen beszűkítjük, és a maradékot terc-butanollal liofilizáljuk. A kvantitatív termeléssel keletkező, vékonyrétegkromatográfiásan (Rfloo = 0,l, szilikagélen) egységes terméket azonnal feldolgozzuk. 40. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 5 1,73 g 18. pontban leírt peptidszármazékot 50°-on 10 ml dimetilformamidban oldunk. — 20°-ra hűtés után 0,9 ml 4,2 n dioxános sósavoldatot csepegtetünk hozzá. Ezután — 15°-on 0,22 ml terc-butilnitritet adunk hozzá, és 15 percig — 15°-on reagáltatjuk. Ezután ismét 10 — 20°-ra hűtjük, majd 0,53 ml trietilamint és 1,6 g 39. pontban leírt peptidszármazék 40 ml 90%-os dimetilformamidos oldatát csepegtetjük hozzá. A hőmérsékletet egy óra alatt 0c -ra emeljük, mialatt a pH-értéket trietilamin szakaszos adagolásával 7 és 8 között tartjuk. 15 Összesen 0,25 ml trietilamint adunk hozzá. További 15 órán át 0°-on keverjük, majd a terméket éterbe öntéssel kicsapjuk, a csapadékot leszűrjük, és éterrel és vízzel mossuk. Tisztítás céljából egyszer dimetilformamid-etilacetát elegyből és egyszer dimetilformamid-0,02 n só-20 savoldat elegyből kicsapjuk. A tiszta anyag szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rnoo = 0,40 értéket ad. 25 41. Z-Ala-Pro-NH2 2,28 g H-Pro-NH2 és 7,57 g Z-Ala-ONP vegyületet oldunk 20 ml dimetilformamidban, és a sárga oldatot 18 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 30 nagy vákuumban szárazra pároljuk, a maradékhoz étert adunk, és a keletkezett port alaposan eldörzsöljük. Leszívatás és szárítás után 5,5 g Z-Ala-Pro-NH2 vegyület keletkezik, Op.: 167,5—168,5°. [a]f,° = 74° (c = l, metanolban). 42. Z-Gly-Ala-Pro-NH2 27,1 g fenti dipeptidszármazékot 425 ml etanolban 40 oldunk és 85 ml 1,0 n vizes sósavoldat hozzáadása után 4,25 g 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénezés befejezése után az oldatot 40—50° fürdőhőmérsékleten vákuumban bepároljuk. A maradékot 40°-on 40 ml dimetilformamidban oldjuk, 45 és az oldatot 20°-ra hűtjük. Ezután 29,1 g Z-Gly-ONP vegyületet adunk hozzá, és oldódás után 45 perc alatt 11,2 ml abszolút trietilamint csepegtetünk hozzá keverés közben. Még 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A szuszpenziót 40°-on és 0,01 torr nyomáson bepárol-50 juk, és a maradékot 600 ml víz és 300 ml éter között megoszlatjuk. A vizes fázist kétszer 300—300 ml éterrel és az éteres fázist kétszer 300—300 ml vízzel extraháljuk. A vizes frakciókat együttesen vákuumban 40—50°-on bepároljuk, és többször, kloroformot hozzáadva és 55 a vizet lepárolva tisztítjuk. Az alaposan megszárított maradékot 40—50°-on 500 ml etilacetátban felvesszük, az oldhatatlan trietilamin-hidrokloridot leszűrjük, és á szűrlethez 30—40°-on 10 ml étert adunk, miáltal kristályosodás indul meg. Kb. 20 óráig + 5—- + 10°-on 60 tartjuk, majd a kristályokat elválasztjuk, mossuk és szántjuk. Op.: 105—106°. A termék 3% trietilamin-hidrokloridot tartalmaz. Ezt ilyen formában továbbreagáltathatjuk. Tisztítás céljából 5,0 g fenti nyers kristályos anyagot 10 ml vízben oldunk, és 20 ml metilén-65 kloridot, majd 15 ml telített káliumkarbonátoldatot 33
