166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
61 16668fr 62' etilacetát-metanol (9 : 1) elegyben melegítve oldjuk, és jégfürdőn hűtve 80 ml éterrel kicsapjuk. A terméket színtelen, amorf porként kapjuk, op:: 146—148°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf -értékeket kaptuk: kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben Rf —0,55; kloroform-aceton (1: 1) rendszerben Rf = 0,60; R f89 =0,43; {«]j} = +6+0,5° (c = 2,0, dimetilformamidban). 18:Z-Thr(tBu)-Tyr(tBü)-Thr(tBu)-Gin-Asp(OíBü)-Phe-NH-NH2 1,91 g Z-Thr(tBü)iTyr(tBü)-Thr(tBú)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 80 ml metanolban oldunk, és 8 ml hidrazinhidráttal elegyítjük. 22 órás, szobahőmérsékleten történő állás után a kivált terméket elválasztjuk, és nagy vákuumban 60°-on szárítjuk. így a mikrokristályos hidrazid keletkezik. Op.: 226—229° (bomlás közben). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfias vizsgálat során a következő Rf -értékek adódnak: kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben Rf —0,32; ciklöheXán-aceton (3:7) rendszerben Rf = 0,23; Rf89 = 0,34í [a}|0 = +4° + 1° (c = 1,0, dimetilformamidban). 19. Z-Lys(BÖC)-Phe-OMe 25,0 g Z-Lys(BOC)-ONP vegyület és 10,7 g H-Phe-OMe hidroklorid 70 ml dimetilformamidos oldatához keverés közben szobahőmérsékleten' 6,9 ml trietilamint adunk és még 18 órán át keverjük. Etilacetátos hígítás után káliumkarbonátoldattal nitrofenol-mentesre mossuk, 0,1 mólos citromsavoldattal és vízzel kirázzuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A védett peptidet etiíacetáMiexán elegyből' átkristályosítjuk. Op.: 78—80°.' Szilikágélés vékonyrétegen futtatva klóroförm-acetón (8 :2) rendszerbén Rf = 0,45. 20. Z-Lys(BOC)-Phe-NH-NH2 27 g fenti dipeptidmetilésztert 135 ml meleg metanolban oldunk, és szobahőmérsékleten 25 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá, majd 16 órán át állni hagyjuk. A kristályos elegyhez 135 nil vizet adunk, leszívatjuk; és vízzel jól kimossuk. Op.: 173—174°, metanol-víz elegyből átkristályosítva. Rf= 0,3, kloroform-metanol (95 : 5) rendszerben, szilikágélés lemezen. 21. Z-Lys(BOC)-Phé-His-OMe 5,4 g Z-Lys(BOC)Phe-NH-NH2 40 ml dimetilformamidos oldatához — 16°-on 6,8 ml 3,66 n diöxános sósavoldátot és 1,5 ml'terc-butilnitritet adunk. 10 percig — 10 és —15° közötti hőmérsékleten tartjuk, majd 3,5 ml trietilamint adunk hozzá. 3,64 g szilárd H-His-OMe. dihidroklorid vegyületet adunk hozzá, majd belecsepegtetünk 4,2 ml trietilamint. 1 óra alatt 0°-ra hagyjyk felmelegedni, mialatt összesen 0,8 ml trietilamin hozzáadásával kb. pH -=7 értéket állítunk be. Egy éjszakán át 0°-on keverjük, majd 250 ml vízbe öntjük, és az olajos terméket vízzel alaposan eldörzsölve pöralakban kapjuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkroiriatögráfiás vizsgálat során klóroförm-métanöl (9 :1) rendszerben Rf = 0,4; 22 H-Lys(BOC)-Phé-His-OMé 6,8 g Z-Iiys(BOC)-Phé-HiS-OMe 140 ntí metánolös* 10 oldatát 1 g 10%-os pálládiümszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hídftjgéhézés befejeződése utáti1 a katalizátort leszűrjük1 , a szűrletét szárazra pároljuk-, és f a maradékot azonnal továbbalakítjuk. 15 23. Z-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-OMe 5,4 g H-Lys(BOC)-Phé-Hís-OMe és 4,5 g Z-Ksti-öW vegyületet oldunk 20 ml dimetilformamidban, és 20 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Etilacetát hozzáadása után a peptidszármazékot kicsapjuk, leszűrjük, és éterrel mossuk. Metanolból átkristáíyosííva a terfriék 182—183°-on olvad. Szilikágélés vékonyrétegkromatógráffiban Rnoo = Ö,57; W*= -28"* (c = l, díméíil-25 formamidbah). 24.Z-Asn-Lys(BÖC)-Pné-His-NH-NH2 30 3,97 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phé^His-OMe vegyületét 8 ml meleg dimetilformamidban és 12 ml metanolban oldunk. A még kb. 30°-os oldathoz 2,5 ml hidrazinhidrátot adunk, és 20 órán át szobahőmérsékletén állni hagyjuk. Víz hozzáadása után a peptidhidrazid kicsapódik, 35 ezt lészűrjük; és vízzel hidrazirtmentesre möásuk. A terméket etanolböl átkristáíyosltjük; Op.: 2ÖÖ-L -2Őí q . Rfl3e = 0,5, szilikagél vékonyrétegért. 46 25. H-Phe-Pro-OM. mönohidráf Z-Phé-Pro-Öíí vegyületet katalitikusan mötanöl-víz (4'-. 1) elegyben palládiühiszén-katalizátórral redíikaM szabad péptiddé alakítunk át. A katalizátort leszüYjük; 45 és az oldatot kis térfogatra szűkítjük; aceton hozzáadd sával kikristályosítjuk, mégpedig dipeptid-möriöhídrátM ként. Op.: 125—128°. 50 26. Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-OH 20,2 g Z-Thr(tBu)-OSUf vegyületét, 13,3 g'H-Hk' -Pro-OH mónohidrátöt és 6,54 ml' trietilamint oldunk 80 ml dimetilformamidban; egy éjszakán át kb. 2Ö°-ort 55 állni hagyjuk, majd nagy vákuumban ragadós massza keletkezéséig koncentráljuk be. Ezt 500 ml etiläcetätban oldjuk, és ötször 100—100 ml 5°4-os borkősavoldattal, majd a semlegességig vízzel mossuk. A szerves fázist szárazra pároljuk, és a visszamaradó szilárd habot porít-60 juk, majd nagy vákuumban 40é -on szárítjuk. Etilacetát-petroléter elegyből kétszer kicsapva 13,3 g amorf, kromatográfiásan tiszta tripeptidszármazékot kapunk, melynek olvadáspontja nem jól definiált, 75—85° között van. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfias 65 vizsgálat során Rni 5 = 0,68; Rfi2iA = 0,57. 31
