166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
59 166686 60 11. Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 38,6 g keletkezett H-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 42,0 g Z-Gln-ONP 170 ml dimetilformamidos oldatával átlátszó, világossárga oldattá oldunk, és keverés közben lassan 13,9 ml trietilamint adunk hozzá. Narancsszínű szuszpenzió keletkezik, melyet 24 órán át 30—35° fürdőhőmérsékleten keverünk. Ez alatt az idő alatt további 40 ml dimetilformamidot és még 1,39 ml trietilamint adunk hozzá. Feldolgozás céljából a csapadékot 4 liter kloroformban oldjuk, és egy 20 lépcsős ellenáramú megoszlató készülékben (fázistérfogatok: alsó fázis 400 ml, felső fázis 200 ml egy edényben) egymásután 1 liter 5%-os citromsavoldattal, 400 ml telített nátriumkloridoldattal, 6 liter kb. 2 n szódaoldattal és 2,8 liter telített nátriumkloridoldattal mossuk. Szárítás és bepárolás után a tripeptidszármazékot 1,8 liter etanolból hűtőszekrényben lassan kikristályosítjuk. 186—188° olvadáspontú Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet kapunk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf -értékek adódtak: kloroform-metanol (9:1) rendszerben Rf = 0,39; kloroform-aceton (1:1) rendszerben Rf = 0,24; Rfl02 £ = 0,69, Rf89 = 0,46, Rf43A =0,65. [a]g» = - 28°+V (c = l,3% dimetilformamidban). 12. H-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 . hidroklorid 7,55 g Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 400 ml metanolban oldunk, 4,1 ml 3 n dioxános sósavoldatot adunk hozzá, és 2 g 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort leszívatjuk, az oldatot bepároljuk, így a H-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 hidrokloridot színtelen habként kapjuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rr értékeket kaptuk: kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben Rf = 0,13, kloroform-aceton (25 : 75) rendszerben Rf =0,14, Rfl02E = —0,22. 13. Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 A 12. pontban keletkezett összes hidrokloridot és 7,4 g Z-Thr(tBu)-OSU vegyületet 14 ml dimetilformamidban oldunk, és ehhez az oldathoz jégfürdőn történő hűtés közben 1,72 ml trietilamint csepegtetünk. Ezután a barnás szuszpenziót 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A szokásos, sok etilacetátos oldatban történő feldolgozás (3—3-szor 5%-os citromsavoldattal és kb. 2 n nátriumkarbonátoldattal mosva, telített nátriumkloridoldattal semlegesre mosva, nátriumszulfát felett szárítva és vákuumban 30—40° -on bepárolva) után a nyers terméket etanolban aktívszénnel kezeljük, és 90 ml etanolból hűtőszekrényben kikristályosítjuk. Op.: 155—161°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf -értékeket kaptuk: kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben Rf = 0,52; ciklohexán-aceton (3 :7) rendszerben Rf = 0,48; Rf88 = 0,48; Rfi2iA = 0,76. [a]g* = - 4° ± 0,5° (c = 2,3% dimetilformamidban). 14. H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 478 mg Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 150 ml metanolban oldva 100 mg 10%-os pal-5 ládiumszén katalizátorral szobahőmérsékleten semlegesen hidrogénezzük 395 mg színtelen hab alakú H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet kapunk, melyet minden további tisztítás nélkül használunk fel a következő kondenzációhoz. 10 Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon a következő Rf -értékek figyelhetők meg: kloroform-metanol (1 : 1) rendszerben Rf = 0,75; kloroform-metanol (9:1) rendszerben Rf = 0,17;acetonban R f = 0,18; Rf^E =0,23; Rt» = 0,12. 15 15. Z-Tyr(t Bu)-Thr(tBu)-Gl n-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 687 mg Z-Tyr(tBu)-OH diciklohexilammóniumsót 20 kloroformos közegben vizes citromsavoldattal kirázzuk, és a keletkezett szabad, tiszta olajos savhoz 6,5 ml tetrahidrofurán és 0,139 ml N-metilmorfolin elegyét adjuk. — 22°-on 0,170 ml klórhangyasav-izobutilésztert adunk hozzá, és fél órán át — 22 és — 10° közötti hőmérsék-25 léten keverjük. Ezután a fentiekben leírt H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 15 ml tetrahidrofurános, előre hűtött oldatát csepegtetjük hozzá, és 5 ml ugyanilyen oldószerrel utánamossuk. Fél órán át —10°-on, majd még 15 óráig szobahőmérsékleten keverjük. 30 Vákuumban bepároljuk és etilacetátos oldatban a szokásos módon feldolgozzuk (lásd 13. pont). A nyers terméket 15 ml etilacetátban oldjuk, 40 ml éterrel kicsapjuk, és metanolból hűtőszekrényben kikristályosítjuk. Az anyag rövid, vastag tűs alakú, amely nagy 35 vákuumban 50°-on szárítva szétmállik. Op.: 169—173°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf -értékeket kapjuk: kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben Rf = 0,46; kloroformmetanol (1 : 1) rendszerben Rf = 0,95; kloroform-aceton 40 (1 : 1) rendszerben Rf = 0,44; Rf89 =0,61; Rface ton = 0,68, Rno2E = 0,73. [ag = - 54° ± 0,5° (c = 2,0% dimetilformamidban). 45 16. H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCHs 2,36 g Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 450 ml metanolos közegben 500 mg 10%-os palládiumszén katalizátor jelenlétében a szoká-50 sos módon, szobahőmérsékleten hidrogénezzük. Színtelen habot kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiásan egységes, és mint ilyen felhasználható a továbbiakban. Vékonyrétegkromatográfiás Rf-értékek (szilikagéles lemezen): kloroform-metanol (95 : 5) rendszerben Rf = 55 0,22; Rf89 = 0,42. 17. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 60 A 16. pontban előállított terméket és 1,48 g Z-Thr (tBu)-OSU vegyületet oldunk 3 ml dimetilformamidban, és 21 óráig szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot sok etilacetáttal hígítjuk, és a szokásos módon feldol-65 gozzuk (lásd a 13. pontot). A nyers terméket 30 ml 30
