166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
57 166686 58 hozzá. Ezután 0,044 ml terc-butilnitritet adunk hozza, és 15 percig — 10°-on tartjuk. 230 mg H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OH, 4 ml dimetilformamid,' 1 ml víz és 0,25 ml trietilamin elegyét adjuk 5 hozzá. 18 órán át 0°-on állni hagyjuk, 0,01 torr nyomáson és 35° fürdőhőmérsékleten kis térfogatra bepároljuk, és a dekapeptidet víz hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot eldörzsöljük, leszívatjuk és exszikkátorban kalciumklorid felett szárítjuk. A port 7 ml metanolban 10 szuszpendáljuk 0°-on, alaposan eldörzsöljük és leszívatjuk. leszívatjuk és ezt 1 liter kloroformmal extraháljuk. Az eluátumot szárazra pároljuk, és a maradékot petroléterrel eldörzsöljük. A petroléteres fázist dekantáljuk, majd az oldhatatlan terméket szárítjuk, és tisztítás céljából 3 ml-t petroléterből kicsapunk. A tetrapeptidszármazékot amorf, szilárd porként kapjuk. Szilikagéles lemezeken végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján Rf = 0,62, kloroform-metanol (98 : 2) rendszerben. 4. H-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe.acetát 980 mg TRI-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe vegyületet 30°-on 25 ml 75%-os ecetsavban oldunk, és 1 órán át állni hagyjuk. Ezután szárazra pároljuk és a maradékot éterrel többször eldörzsöljük. A H-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe éterben oldhatatlan acetátját vákuumban 35°-on szárítjuk, és közvetlenül felhasználjuk. 5. DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe 750 mg DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-NHNH2 vegyületet (1. 1287 601 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás 1. példájának 13. pontja) 6 ml dimetilformamidban oldunk, — 20°-ra hűtünk és 3,5 ml 1 n etilacetátos sósa voldatot csepegtetünk hozzá. Ezután 0,16 ml terc-butilnitritet adunk hozzá, és a reakcióelegyet 15 percig —10°-on tartjuk. Ezután adjuk hozzá az 500 mg H-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe acetát 4 ml — 10°-ra hűtött dimetilformamidos oldatát és 0,7 ml trietilamint, és 30 percig — 10°-on és 18 órán át 0°-on állni hagyjuk. Nagy vákuumban 40° fürdőhőmérsékleten kb. 5 ml-re pároljuk be, és a terméket jeges víz hozzáadásával kicsapjuk. Alapos eldörzsölés után leszívatjuk, jeges vízzel utánamossuk, és a nyers hexapeptidszármazékot exszikkátorban kalciumhidroxid felett szárítjuk. Tisztítás céljából etilacetát-ciklohexán elegyből háromszor kicsapjuk. A termék szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során toluol-aceton (7 : 3) rendszerben 0,47 Rrértéket mutat. 6. H-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OH 430 mg DPC-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OMe vegyületet 10 ml 80%-os ecetsavban oldunk, 7 órán át 28°-on állni hagyjuk, forgó bepárlón 35° fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk, 3 órán át 35°-on és 0,01 torr nyomáson szárítjuk, 30 ml metanolban oldjuk, majd 3 ml 1,0 n nátriumhidroxidoldatot adunk hozzá, 1 órán át 28°-on keverjük, 2 ml jégecetet adunk hozzá és forgó bepárlón 35° fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékot jeges vízzel eldörzsöljük, mialatt a pH-t 6—7 értékre állítjuk be, leszívatjuk, és jeges vízzel utánamossuk, majd exszikkátorban kalciumklorid felett szárítjuk. 7. BOCTCys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Nva-Leu-Gly-OH 270 mg BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-NH-NH2 vegyülethez 4 ml dimetilformamidot adunk, — 20°-ra hűtjük, és 1,2 ml 1 n etilacetátos sósavoldatot csepegtetünk 8. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Nva-Leu-Gly-OH 105 mg 7. pontban előállított dekapeptidet 20 ml dimetilformamidban oldunk, és ezt 1 óra alatt 150 mg jód 100 ml metanolos, élénken kevert oldatához csepegtetjük. További egy óráig keverjük, 0°-on 1 n nátriumtioszulfátoldat hozzáadásával elszíntelenítjük, majd forgó bepárlón kb. 20 ml-re pároljuk be, és 300 ml éter hozzáadásával kicsapjuk. Leszívatjuk, vákuumban 30°-on szárítjuk, és a port vízzel eldörzsöljük. Leszivatjuk, és exszikkátorban kalciumklorid felett szárítjuk. 9. Z-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 30,3 g Z-Asp(OtBu)-ONP vegyületet és 18,3 g H-Phe-OCH3 hidrokloridot 150 ml dimetilformamidban oldunk, és az átlátszó oldathoz 11,8 ml trietilamint csepegtetünk. A keletkezett szuszpenziót 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, mialatt az sötétsárga lesz. Ezután vákuumban kb. 100 ml-re pároljuk be és 1 liter etilacetát-kloroform (4 : 1) elegyben háromszor 5%-os citromsavoldattal, tizenkilencszer kb. 2 n nátriumkarbonátoldattal és telített nátriumkloridoldattal semleges reakcióig kirázzuk. A nyers terméket egy sárga olajat, éteres oldatban aktívszénnel kezeljük, és beoltva 650 ml éter-hexán (1 : 1) elegyből hűtőszekrényben kikristályosítjuk. Színtelen tűk keletkeznek. Op.: 74,5—76,5°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során az Rf -érték kloroform-metanol (95: 5) rendszerben 0,74, kloroform-aceton (75 : 25) rendszerben 0,65. 10. H-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 . hidroklorid 48,6 g Z-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 700 ml metanolos oldatban, 33,5 ml 3 n dioxános sósavoldat és 5 g 10%-os palládium-szén katalizátor hozzáadásával rázókacsában szobahőmérsékleten dekarbobenzoxilezünk. A hidrogénfelvétel befejeződése után az elegyet leszűrjük és bepároljuk. 38,7 g fehér habot kapunk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf = 0,60 kloroform-metanol (9 : 1) rendszerben, Rf = 0,58 kloroform-aceton (1:1) rendszerben, Rno2E = 0,42. A terméket minden további tisztítás nélkül használjuk fel a következő kondenzációhoz. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 29
